Հիմնական մոլեկուլային կենսաբանության տերմինների բացատրություն
1. cDNA և cccDNA. cDNA-ն երկշղթա ԴՆԹ է, որը սինթեզվում է mRNA-ից հակադարձ տրանսկրիպտազի միջոցով;cccDNA-ն պլազմիդային երկշղթա փակ շրջանաձև ԴՆԹ է, որը զերծ է քրոմոսոմից:
2. Ստանդարտ ծալովի միավոր. սպիտակուցի երկրորդական կառուցվածքի միավոր α-խխունջը և β-թերթիկը կարող են ձևավորել կառուցվածքային բլոկներ՝ հատուկ երկրաչափական դասավորություններով տարբեր միացնող պոլիպեպտիդների միջոցով:Որոշված ծալման այս տեսակը սովորաբար կոչվում է սուպեր երկրորդական կառուցվածք:Գրեթե բոլոր երրորդական կառույցները կարելի է նկարագրել այս ծալովի տեսակներով և նույնիսկ դրանց համակցված տեսակներով, ուստի դրանք կոչվում են նաև ստանդարտ ծալովի միավորներ:
3. CAP. ցիկլային ադենոզին մոնոֆոսֆատ (cAMP) ընկալիչ սպիտակուց CRP (cAMP ընկալիչ սպիտակուց), cAMP-ի և CRP-ի համակցությունից հետո ձևավորված համալիրը կոչվում է ակտիվացնող սպիտակուց CAP (cAMP ակտիվացված սպիտակուց):
4. Պալինդրոմային հաջորդականություն. ԴՆԹ-ի հատվածի մի հատվածի հակադարձ կոմպլեմենտար հաջորդականությունը, հաճախ սահմանափակող ֆերմենտային տեղամաս:
5. micRNA. Կոմպլեմենտար միջամտող ՌՆԹ կամ հակազգայական ՌՆԹ, որը լրացնում է mRNA հաջորդականությունը և կարող է արգելակել mRNA-ի թարգմանությունը:
6. Ռիբոզիմ՝ կատալիտիկ ակտիվությամբ ՌՆԹ, որն ավտոկատալիտիկ դեր է խաղում ՌՆԹ-ի միացման գործընթացում։
7. Մոտիվ. Սպիտակուցի մոլեկուլների տարածական կառուցվածքում կան որոշ տեղական շրջաններ, որոնք ունեն նմանատիպ եռաչափ ձև և տոպոլոգիա:
8. Ազդանշանային պեպտիդ՝ սպիտակուցի սինթեզի ժամանակ N-վերնամասում 15-36 ամինաթթուների մնացորդներով պեպտիդ, որն ուղղորդում է սպիտակուցի տրանսմեմբրանը։
9. Թուլացնող. Նուկլեոտիդային հաջորդականություն օպերատորի շրջանի և կառուցվածքային գենի միջև, որն ավարտում է տրանսկրիպցիան:
10. Կախարդական կետ. Երբ բակտերիաները աճում են և բախվում են ամինաթթուների իսպառ բացակայությանը, բակտերիաները շտապ արձագանք են տալիս՝ դադարեցնելու բոլոր գեների արտահայտումը:Ազդանշանները, որոնք առաջացնում են այս արտակարգ իրավիճակների արձագանքը, գուանոզին տետրաֆոսֆատն են (ppGpp) և գուանոզին պենտաֆոսֆատը (pppGpp):PpGpp-ի և pppGpp-ի դերը միայն մեկ կամ մի քանի օպերոն չէ, այլ ազդում է դրանց մեծ թվի վրա, ուստի դրանք կոչվում են սուպերկարգավորիչներ կամ կախարդական բծեր:
11. Վերին հոսանքով խթանող տարր. վերաբերում է ԴՆԹ-ի հաջորդականությանը, որը կարգավորիչ դեր է խաղում պրոմոութորի գործունեության մեջ, ինչպես օրինակ՝ TATA-ն -10 շրջանում, TGACA-ն -35 շրջանում, ուժեղացուցիչները և թուլացնողները:
12. ԴՆԹ-ի զոնդ՝ ԴՆԹ-ի պիտակավորված հատված՝ հայտնի հաջորդականությամբ, որը լայնորեն օգտագործվում է անհայտ հաջորդականությունների հայտնաբերման և թիրախային գեների ցուցադրման համար:
13. SD հաջորդականություն. Ռիբոսոմի և mRNA-ի կապող հաջորդականությունն է, որը կարգավորում է թարգմանությունը:
14. Մոնոկլոնալ հակամարմին. հակամարմին, որը գործում է միայն մեկ հակագենային որոշիչի դեմ:
15. Կոսմիդ. դա արհեստականորեն կառուցված էկզոգեն ԴՆԹ վեկտոր է, որը պահպանում է COS շրջանները ֆագի երկու ծայրերում և կապված է պլազմիդի հետ:
16. Կապույտ-սպիտակ բծերի զննում. LacZ գենը (կոդավորում է β-գալակտոզիդազը), ֆերմենտը կարող է քայքայել X-gal քրոմոգեն սուբստրատը (5-բրոմ-4-քլոր-3-ինդոլ-β-D-գալակտոզիդ)՝ առաջացնելով կապույտ, այդպիսով շտամը դարձնելով կապույտ:Երբ էկզոգեն ԴՆԹ-ն տեղադրվում է, LacZ գենը չի կարող արտահայտվել, և շտամը սպիտակ է, որպեսզի ցուցադրվի ռեկոմբինանտ բակտերիաները:Սա կոչվում է կապույտ-սպիտակ ցուցադրություն:
17. Cis-գործող տարր. ԴՆԹ-ում հիմքերի հատուկ հաջորդականություն, որը կարգավորում է գեների արտահայտումը:
18. Klenow enzyme. ԴՆԹ պոլիմերազ I-ի մեծ հատված, բացառությամբ, որ 5'3' էկզոնուկլեազային ակտիվությունը հեռացվում է ԴՆԹ պոլիմերազ I հոլոֆերմենտից:
19. Խարսխված ՊՇՌ. օգտագործվում է հետաքրքրող ԴՆԹ-ն մի ծայրում հայտնի հաջորդականությամբ ուժեղացնելու համար:Անհայտ հաջորդականության մի ծայրին ավելացվել է poly-dG պոչ, այնուհետև poly-dC-ն և հայտնի հաջորդականությունը օգտագործվել են որպես պրայմերներ PCR-ի ուժեղացման համար:
20. Ֆյուզիոն սպիտակուց. Էուկարիոտիկ սպիտակուցի գենը կապված է էկզոգեն գենի հետ, իսկ բնօրինակ գենային սպիտակուցի և էկզոգեն սպիտակուցի թարգմանությունից կազմված սպիտակուցը արտահայտվում է միաժամանակ։
Մոլեկուլային կենսաբանության այլ տերմիններ
1. ԴՆԹ-ի ֆիզիկական քարտեզը ԴՆԹ-ի մոլեկուլի (սահմանափակող էնդոնուկլեազով մարսված) բեկորների դասավորության հերթականությունն է:
2. RNase-ի տրոհումը բաժանվում է երկու տեսակի (ավտոկատալիզի) և (հետերոկատալիզի):
3. Պրոկարիոտներում երեք մեկնարկային գործոն կա՝ (IF-1), (IF-2) և (IF-3):
4. Տրանսմեմբրանային սպիտակուցները պահանջում են ուղղորդում (ազդանշանային պեպտիդներ), իսկ սպիտակուցային շապերոնների դերն է (օգնում է պեպտիդային շղթան ծալել սպիտակուցի բնածին կոնֆորմացիայի մեջ):
5. Փրոմոութերների տարրերը ընդհանուր առմամբ կարելի է բաժանել երկու տեսակի՝ (հիմնական պրոմոութեր տարրեր) և (վերին հոսանքով խթանող տարրեր):
6. Մոլեկուլային կենսաբանության հետազոտական բովանդակությունը հիմնականում ներառում է երեք մաս՝ (կառուցվածքային մոլեկուլային կենսաբանություն), (գեների արտահայտում և կարգավորում) և (ԴՆԹ ռեկոմբինացիայի տեխնոլոգիա):
7. Երկու հիմնական փորձերը, որոնք ցույց են տալիս, որ ԴՆԹ-ն գենետիկ նյութ է, հետևյալն են (մկների պնևմակոկային վարակ) և (Escherichia coli-ի T2 ֆագային վարակ):ներուժ):
8. hnRNA-ի և mRNA-ի միջև կա երկու հիմնական տարբերություն. (hnRNA-ն միացվում է mRNA-ի վերածվելու գործընթացում), (mRNA-ի 5' ծայրը ավելացվում է m7pGppp գլխարկով, և կա լրացուցիչ պոլիադենիլացում mRNA թթվի (polyA) պոչի 3' ծայրում):
9. Սպիտակուցի բազմաբնակարանային ձևի առավելություններն են (ենթաբաժինը ԴՆԹ-ի օգտագործման խնայող մեթոդ է), (կարող է նվազեցնել սպիտակուցի սինթեզի պատահական սխալների ազդեցությունը սպիտակուցի ակտիվության վրա), (ակտիվությունը կարող է շատ արդյունավետ լինել և արագ բացվել և փակվել):
10. Սպիտակուցների ծալման մեխանիզմի առաջին միջուկավորման տեսության հիմնական բովանդակությունը ներառում է (միջուկացում), (կառուցվածքային հարստացում), (վերջնական վերադասավորում):
11. Գալակտոզան երկակի ազդեցություն ունի բակտերիաների վրա;մի կողմից (այն կարող է օգտագործվել որպես ածխածնի աղբյուր բջիջների աճի համար);մյուս կողմից (դա նաև բջջային պատի բաղադրիչ է):Հետևաբար, ֆոնային մակարդակում մշտական սինթեզի համար անհրաժեշտ է cAMP-CRP-ից անկախ խթանող S2;Միևնույն ժամանակ, բարձր մակարդակի սինթեզը կարգավորելու համար անհրաժեշտ է cAMP-CRP-ից կախված պրոմոուտեր S1:Տառադարձումը սկսվում է (S2)-ից G-ով և (S1)-ից՝ առանց G-ի:
12. Ռեկոմբինանտ ԴՆԹ տեխնոլոգիան հայտնի է նաև որպես (գենի կլոնավորում) կամ (մոլեկուլային կլոնավորում):Վերջնական նպատակն է (մի օրգանիզմի գենետիկական տեղեկատվության ԴՆԹ-ն տեղափոխել մեկ այլ օրգանիզմ):Տիպիկ ԴՆԹ ռեկոմբինացիայի փորձը սովորաբար ներառում է հետևյալ քայլերը. (1) Դոնոր օրգանիզմի թիրախային գենի (կամ էկզոգեն գենի) արդյունահանումը և այն ֆերմենտային կերպով միացնել ԴՆԹ-ի մեկ այլ մոլեկուլին (կլոնավորման վեկտոր)՝ ձևավորելու նոր ռեկոմբինանտ ԴՆԹ մոլեկուլ:② ԴՆԹ-ի ռեկոմբինանտ մոլեկուլը տեղափոխվում է ստացող բջիջ և վերարտադրվում ստացող բջիջում:Այս գործընթացը կոչվում է փոխակերպում:③ Ստուգեք և հայտնաբերեք այն ստացող բջիջները, որոնք կլանել են ռեկոմբինանտ ԴՆԹ-ն:④Աճեցրե՛ք մեծ քանակությամբ ռեկոմբինանտ ԴՆԹ պարունակող բջիջները՝ պարզելու համար, թե արդյոք արտասահմանյան օգնության գենը արտահայտված է:
13. Գոյություն ունի պլազմիդային վերարտադրության երկու տեսակ՝ նրանք, որոնք խստորեն վերահսկվում են հյուրընկալող բջիջների սպիտակուցի սինթեզով, կոչվում են (ամուր պլազմիդներ), իսկ նրանք, որոնք խստորեն չեն վերահսկվում հյուրընկալող բջիջների սպիտակուցի սինթեզով, կոչվում են (հանգիստ պլազմիդներ):
14. ՊՇՌ ռեակցիայի համակարգը պետք է ունենա հետևյալ պայմանները՝ ա.ԴՆԹ-ի պրայմերներ (մոտ 20 հիմք)՝ բաժանվելիք թիրախ գենի երկու շղթաների յուրաքանչյուր ծայրում լրացնող հաջորդականությամբ:բ.Ջերմային կայունությամբ ֆերմենտներ, ինչպիսիք են՝ TagDNA պոլիմերազը:c, dNTPd, ԴՆԹ-ի հետաքրքրության հաջորդականությունը որպես ձևանմուշ
15. PCR-ի հիմնական ռեակցիայի գործընթացը ներառում է երեք փուլ.
16. Տրանսգենային կենդանիների հիմնական գործընթացը սովորաբար ներառում է.②պատվաստված բեղմնավորված ձվի կամ սաղմնային ցողունային բջիջի փոխպատվաստում կանանց արգանդի մեջ;③ Ամբողջական սաղմնային զարգացում և աճ օտար գեներով սերունդների համար.④ Օգտագործեք այս կենդանիներին, որոնք կարող են օտար սպիտակուցներ արտադրել որպես բուծող նոր հոմոզիգոտ գծեր բուծելու համար:
17. Հիբրիդոմայի բջջային գծերը ստեղծվում են (փայծաղի B) բջիջները (միելոմա) բջիջների հետ հիբրիդացնելու միջոցով, և քանի որ (փայծաղի բջիջները) կարող են օգտագործել հիպոքսանտինը և (ոսկրային բջիջները) ապահովել բջիջների բաժանման գործառույթները, դրանք կարող են աճել HAT միջավայրում:աճել.
18. Հետազոտությունների խորացման հետ մեկտեղ առաջին սերնդի հակամարմինները կոչվում են (պոլիկլոնալ հակամարմիններ), երկրորդ սերունդը (մոնոկլոնալ հակամարմիններ), երրորդ սերունդը (գենետիկ ինժեներական հակամարմիններ):
19. Ներկայումս միջատների վիրուսների գենետիկական ինժեներիան հիմնականում կենտրոնացած է բակուլովիրուսի վրա, որն արտահայտվում է (էկզոգեն տոքսինի գենի) ներմուծմամբ.(գեներ, որոնք խախտում են միջատների բնականոն կյանքի ցիկլը);(վիրուսի գեների փոփոխություն):
20. Կաթնասունների ՌՆԹ պոլիմերազ II խթանիչում TATA, GC և CAAT ընդհանուր տարրերին համապատասխանող տրանսակտիվ սպիտակուցային գործոններն են (TFIID), (SP-1) և (CTF/NF1) համապատասխանաբար:
քսանմեկ.ՌՆԹ պոլիմերազի Ⅱ տրանսկրիպցիոն հիմնական գործոններն են՝ TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, և դրանց կապակցման հաջորդականությունն է՝ (D, A, B, E):Որտեղ TFII-D ֆունկցիան է (կապում է TATA տուփին):
քսաներկու.Տրանսկրիպցիոն գործոնների մեծ մասը, որոնք կապվում են ԴՆԹ-ի հետ, աշխատում են դիմերների տեսքով։Տրանսկրիպցիոն գործոնների ֆունկցիոնալ տիրույթները, որոնք կապվում են ԴՆԹ-ի հետ, սովորաբար հետևյալն են (խխունջ-շրջադարձ-խխունջ), (ցինկ մատի մոտիվ), (հիմնական-լեյցին) կայծակաճարմանդ մոտիվը):
քսաներեք.Գոյություն ունեն երեք տեսակի սահմանափակող էնդոնուկլեազի ճեղքման ռեժիմներ. (կտրվել սիմետրիայի առանցքի 5' կողմից՝ 5' կպչուն ծայրեր առաջացնելու համար), (կտրել համաչափության առանցքի 3' կողմից՝ 3' կպչուն ծայրեր առաջացնելու համար (կտրել համաչափության առանցքի վրա՝ հարթ հատվածներ առաջացնելու համար):
քսանչորս.Պլազմիդի ԴՆԹ-ն ունի երեք տարբեր կոնֆիգուրացիաներ՝ (SC կոնֆիգուրացիա), (oc կոնֆիգուրացիա), (L կոնֆիգուրացիա):Էլեկտրոֆորեզում առաջինն է (SC կոնֆիգուրացիա):
25. Էկզոգեն գեների արտահայտման համակարգեր, հիմնականում (Escherichia coli), (Խմորիչ), (Միջատ) և (Կաթնասունների բջջային աղյուսակ):
26. Տրանսգենային կենդանիների համար սովորաբար կիրառվող մեթոդներն են՝ (ռետրովիրուսային վարակի մեթոդ), (ԴՆԹ միկրոներարկման մեթոդ), (սաղմնային ցողունային բջիջների մեթոդ):
Կիրառական մոլեկուլային կենսաբանություն
1. Անվանե՛ք 5-ից ավելի ՌՆԹ-ների ֆունկցիաները:
Տրանսֆերային ՌՆԹ tRNA Տրանսֆերային ամինաթթու Ռիբոսոմի ՌՆԹ rRNA Ռիբոսոմը կազմում է սուրհանդակ ՌՆԹ մՌՆԹ Սպիտակուցի սինթեզի ձևանմուշ Տարասեռ միջուկային ՌՆԹ hnՌՆԹ-ի հասուն մՌՆԹ-ի փոքր միջուկային ՌՆԹ snRNA-ի նախադրյալը ներգրավված է hnRNA-ի միացման մեջ: Անզգայուն ՌՆԹ anRNA/micRNA Կարգավորում է գենի արտահայտումը Ռիբոզիմ ՌՆԹ Ֆերմենտային ակտիվ ՌՆԹ
2. Ո՞րն է պրոկարիոտային և էուկարիոտիկ խթանիչների հիմնական տարբերությունը:
Պրոկարիոտիկ TTGACA --- TATAAT------ Մեկնարկային տեղամաս-35 -10 Էուկարիոտիկ ուժեղացուցիչ---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Սկսման տեղամաս-110 -70 -25
3. Որո՞նք են բնական պլազմիդների արհեստական կառուցման հիմնական ասպեկտները:
Բնական պլազմիդները հաճախ ունենում են թերություններ, ուստի դրանք պիտանի չեն գենետիկական ինժեներիայի համար որպես կրիչներ օգտագործելու համար և պետք է փոփոխվեն և կառուցվեն. ա.Ավելացրեք համապատասխան սելեկցիոն մարկեր գեներ, ինչպիսիք են երկու կամ ավելի, որոնք հեշտ է օգտագործել ընտրության համար, սովորաբար հակաբիոտիկ գեներ:բ.Բարձրացնել կամ նվազեցնել համապատասխան ֆերմենտի կտրման վայրերը՝ վերահամակցումը հեշտացնելու համար:գ.Կրճատել երկարությունը, կտրել ավելորդ բեկորները, բարելավել ներմուծման արդյունավետությունը և բարձրացնել բեռնման հզորությունը:դ.Փոխեք ռեպլիկոնը՝ ամուրից դեպի ազատ, ավելի քիչ պատճեններից՝ ավելի շատ կրկնօրինակների:ե.Ավելացնել հատուկ գենետիկական տարրեր՝ գենետիկական ինժեներիայի հատուկ պահանջներին համապատասխան
4. Բերե՛ք հյուսվածքներին հատուկ cDNA-ի դիֆերենցիալ զննման մեթոդի օրինակ:
Պատրաստվում են երկու բջիջների պոպուլյացիաներ, թիրախ գենը արտահայտված է կամ բարձր է արտահայտված բջիջներից մեկում, իսկ թիրախ գենը չի արտահայտվում կամ ցածր է արտահայտվում մյուս բջիջում, այնուհետև թիրախ գենը հայտնաբերվում է հիբրիդացման և համեմատության միջոցով:Օրինակ, ուռուցքների առաջացման և զարգացման ժամանակ ուռուցքային բջիջները կներկայացնեն mRNAs արտահայտման տարբեր մակարդակներով, քան նորմալ բջիջները:Հետևաբար, ուռուցքի հետ կապված գեները կարող են զննվել դիֆերենցիալ հիբրիդացման միջոցով:Ինդուկցիայի մեթոդը կարող է օգտագործվել նաև գեների ցուցադրման համար, որոնց արտահայտությունն առաջացել է:
5. Հիբրիդոմա բջջային գծերի առաջացում և սքրինինգ:
Փայծաղի B բջիջները + միելոմայի բջիջները, ավելացրեք պոլիէթիլեն գլիկոլ (PEG)՝ բջիջների միաձուլմանը նպաստելու համար, իսկ փայծաղի B-միելոմայի միաձուլման բջիջները, որոնք աճեցված են HAT միջավայրում (պարունակում է հիպոքսանտին, ամինոպտերին, T) շարունակում են սնուցվել:Բջջային միաձուլումը պարունակում է.Ոսկոր-ոսկրային միաձուլման բջիջներ. չեն կարող օգտագործել հիպոքսանտինը, բայց կարող են սինթեզել պուրինը երկրորդ ճանապարհով՝ օգտագործելով ֆոլաթթու ռեդուկտազ:Ամինոպտերինը արգելակում է ֆոլաթթվի ռեդուկտազը և, հետևաբար, չի կարող աճել:Ոսկոր-փայծաղի միաձուլման բջիջները. կարող են աճել HAT-ում, փայծաղի բջիջները կարող են օգտագործել հիպոքսանտին, իսկ ոսկրային բջիջներն ապահովում են բջիջների բաժանման գործառույթը:
6. Ի՞նչ սկզբունքով և մեթոդով է որոշվում ԴՆԹ-ի առաջնային կառուցվածքը դիդեօքսի տերմինալային վերջնավորման մեթոդով (Սանգերի մեթոդ):
Սկզբունքն է օգտագործել նուկլեոտիդային շղթայի տերմինատոր՝ 2,,3,-դիդեօքսինուկլեոտիդ՝ ԴՆԹ-ի ընդլայնումը դադարեցնելու համար:Քանի որ այն չունի 3-OH, որն անհրաժեշտ է 3/5/ֆոսֆոդիստերային կապերի ձևավորման համար, ԴՆԹ-ի շղթայում ընդգրկվելուց հետո, ԴՆԹ-ի շղթան չի կարող ավելի երկարաձգվել:Համաձայն հիմքերի զուգավորման սկզբունքի, երբ ԴՆԹ պոլիմերազին անհրաժեշտ է dNMP՝ նորմալ ընդլայնված ԴՆԹ շղթային մասնակցելու համար, կա երկու հնարավորություն, մեկը՝ մասնակցել ddNTP-ին, ինչը հանգեցնում է դեզօքսինուկլեոտիդային շղթայի ընդլայնման դադարեցմանը.Մյուսը dNTP-ին մասնակցելն է, որպեսզի ԴՆԹ-ի շղթան դեռ շարունակի երկարաձգվել մինչև հաջորդ ddNTP-ի ներդրումը:Այս մեթոդի համաձայն կարելի է ձեռք բերել ddNTP-ով վերջացող տարբեր երկարությունների ԴՆԹ բեկորների խումբ։Մեթոդը պետք է բաժանվի չորս խմբի՝ համապատասխանաբար ddAMP, ddGMP, ddCMP և ddTMP:Ռեակցիայից հետո պոլիակրիլամիդային գելային էլեկտրոֆորեզը կարող է կարդալ ԴՆԹ-ի հաջորդականությունը՝ ըստ լողի գոտիների:
7. Ո՞րն է ակտիվացնող սպիտակուցի (CAP) դրական կարգավորման ազդեցությունը տրանսկրիպցիայի վրա:
Ցիկլային ադենիլատ (cAMP) ընկալիչի CRP սպիտակուցը (cAMP receptor protein), cAMP-ի և CRP-ի համադրությամբ առաջացած համալիրը կոչվում է CAP (cAMPactivated protein):Երբ E. coli-ն աճեցվում է գլյուկոզայի պակաս ունեցող միջավայրում, CAP-ի սինթեզը մեծանում է, և CAP-ն ակտիվացնում է պրոմոդերները, ինչպիսիք են կաթնաշաքարը (Lac):Որոշ CRP-ից կախված պրոմոութերներ չունեն բնորոշ -35 շրջանի հաջորդականության հատկանիշը (TTGACA), որն ունեն սովորական պրոմոութերները:Ուստի ՌՆԹ պոլիմերազի համար դժվար է կապվել դրան։CAP-ի (ֆունկցիայի) առկայությունը. կարող է զգալիորեն բարելավել ֆերմենտի և պրոմոտորի կապող հաստատունը:Այն հիմնականում ցույց է տալիս հետևյալ երկու ասպեկտները. ① CAP-ն օգնում է ֆերմենտի մոլեկուլին ճիշտ կողմնորոշվել՝ փոխելով պրոմոտորի կոնֆորմացիան և փոխազդեցությունը ֆերմենտի հետ, որպեսզի միավորվի -10 շրջանի հետ և խաղա -35 շրջանի ֆունկցիան փոխարինելու դեր:②CAP-ը կարող է նաև արգելակել ՌՆԹ պոլիմերազի կապը ԴՆԹ-ի այլ տեղամասերի հետ՝ դրանով իսկ մեծացնելով դրա հատուկ խթանիչին կապվելու հավանականությունը:
8. Ի՞նչ քայլեր են սովորաբար ներառում ԴՆԹ-ի ռեկոմբինացիայի տիպիկ փորձը:
ա.Արդյունահանեք դոնոր օրգանիզմի թիրախային գենը (կամ էկզոգեն գենը) և ֆերմենտորեն միացրեք այն ԴՆԹ-ի մեկ այլ մոլեկուլի (կլոնավորման վեկտոր)՝ ձևավորելու նոր ռեկոմբինանտ ԴՆԹ մոլեկուլ:բ.Վերակոմբինանտ ԴՆԹ-ի մոլեկուլը տեղափոխեք ստացող բջիջ և կրկնօրինակեք և պահպանեք այն ստացող բջիջում:Այս գործընթացը կոչվում է փոխակերպում:գ.Ստուգեք և հայտնաբերեք այն ստացող բջիջները, որոնք կլանել են ռեկոմբինանտ ԴՆԹ-ն:դ.Զանգվածային մշակում են ռեկոմբինանտ ԴՆԹ պարունակող բջիջները՝ պարզելու, թե արդյոք արտասահմանյան օգնության գենը արտահայտված է:
9. Գեների գրադարանի կառուցում Տրված են ռեկոմբինանտների սկրինինգի երեք եղանակներ, և գործընթացը համառոտ նկարագրված է:
Հակաբիոտիկների դիմադրության սքրինինգ, ռեզիստենտության ներդիրային ապաակտիվացում, կապույտ-սպիտակ բծերի սկրինինգ կամ ՊՇՌ սքրինինգ, դիֆերենցիալ սքրինինգ, ԴՆԹ-ի հետաքննություն Կլոնավորման վեկտորների մեծ մասը կրում է հակաբիոտիկների դիմադրության գեներ (հակամպիցիլին, տետրացիկլին):Երբ պլազմիդը տեղափոխվում է Escherichia coli, բակտերիաները ձեռք կբերեն դիմադրողականություն, իսկ առանց փոխանցման նրանք դիմադրողականություն չեն ունենա:Բայց չի կարող տարբերակել՝ վերակազմավորվե՞լ է, թե՞ ոչ։Երկու դիմադրողական գեն պարունակող վեկտորում, եթե ԴՆԹ-ի օտար բեկորը տեղադրվում է գեներից մեկի մեջ և առաջացնում է գենի ապաակտիվացում, ապա տարբեր դեղամիջոցներ պարունակող երկու թիթեղների հսկիչ կարող են օգտագործվել դրական ռեկոմբինանտների զննման համար:Օրինակ, pUC պլազմիդը պարունակում է LacZ գենը (կոդավորում է β-գալակտոզիդազը), որը կարող է քայքայել X-gal քրոմոգեն սուբստրատը (5-բրոմ-4-քլորո-3-ինդոլ-β-D-գալակտոզիդ)՝ առաջացնելով կապույտ, այդպիսով շտամը դարձնելով կապույտ:Երբ օտար ԴՆԹ-ն տեղադրվում է, LacZ գենը չի կարող արտահայտվել, և շտամը սպիտակ է, որպեսզի ցուցադրվի ռեկոմբինանտ բակտերիաները:
10. Բացատրե՛ք սաղմնային ցողունային բջիջների միջոցով տրանսգեն կենդանիների ստացման հիմնական գործընթացը:
Սաղմնային ցողունային բջիջները (ES) սաղմնային բջիջներ են սաղմնային զարգացման ընթացքում, որոնք կարող են արհեստականորեն մշակվել և բազմանալ և ունեն այլ տեսակի բջիջների տարբերվելու գործառույթ:ES բջիջների կուլտուրա. Բլաստոցիստի ներքին բջիջների զանգվածը մեկուսացված է և մշակվում:Երբ ES-ը մշակվում է սնուցող շերտում, այն կտարբերակվի տարբեր ֆունկցիոնալ բջիջների, ինչպիսիք են մկանային բջիջները և N բջիջները:Ֆիբրոբլաստներ պարունակող միջավայրում մշակելիս ES-ը կպահպանի տարբերակման գործառույթը:ES-ը կարող է գենետիկորեն մանիպուլյացիայի ենթարկվել, և դրա տարբերակման գործառույթը կարող է ինտեգրվել՝ չազդելով դրա տարբերակման ֆունկցիայի վրա, որը լուծում է պատահական ինտեգրման խնդիրը:Ներդրեք էկզոգեն գեներ սաղմնային ցողունային բջիջների մեջ, այնուհետև իմպլանտացրեք հղի էգ մկների արգանդում, վերածվեք ձագերի և խաչաձևով ստացեք հոմոզիգոտ մկներ:
