Խնդրի վերլուծության ուղեցույց

Հետևյալը վերլուծություն է այն խնդիրների, որոնք կարող են հանդիպել վիրուսային ԴՆԹ/ՌՆԹ-ի արդյունահանման ժամանակ՝ հուսալով, որ օգտակար կլինեն ձեր փորձերին:Բացի այդ, այլ փորձարարական կամ տեխնիկական խնդիրների դեպքում, բացի շահագործման հրահանգներից և խնդիրների վերլուծությունից, մենք տրամադրել ենք տեխնիկական աջակցություն՝ ձեզ օգնելու համար:Եթե ​​որևէ կարիք ունեք, խնդրում ենք կապվել մեզ հետ՝ 028-83360257 կամ էլ.

Tech@foregene.com.

Ոչ նուկլեինաթթվի արդյունահանում կամ ցածր նուկլեինաթթվի ելք

Սովորաբար կան բազմաթիվ գործոններ, որոնք ազդում են վերականգնման արդյունավետության վրա, ինչպիսիք են՝ նմուշի նուկլեինաթթվի պարունակությունը, շահագործման եղանակը, լուծույթի ծավալը և այլն:

Ընդհանուր պատճառների վերլուծություն.

1. Պրոցեդուրայի ընթացքում իրականացվել է սառցե լոգանք կամ ցածր ջերմաստիճանի (4°C) ցենտրիֆուգացիա:

Առաջարկ. Գործել սենյակային ջերմաստիճանում (15-25°C) ողջ գործընթացի ընթացքում, մի սառցե լոգանք և ցածր ջերմաստիճանի ցենտրիֆուգացիա չանել:

2. Նմուշը սխալ է պահվել կամ նմուշը չափազանց երկար է պահվել:

Առաջարկություն. Նմուշները պահեք -80°C ջերմաստիճանում և խուսափեք կրկնակի սառեցումից և հալվելուց;փորձեք օգտագործել նոր հավաքված նմուշները նուկլեինաթթվի արդյունահանման համար:

3. Անբավարար նմուշի լիզ:

Առաջարկություն. Խնդրում ենք համոզվել, որ նմուշը և լիզի աշխատանքային լուծույթը մանրակրկիտ խառնվեն և ինկուբացվեն սենյակային ջերմաստիճանում (15-25°C) 10 րոպե:

4. Էլյուենտի սխալ ավելացում։

Առաջարկություն. Համոզվեք, որ RNase-Free ddH2O-ն ավելացվել է կաթիլաբար մաքրման սյունակի մեմբրանի մեջտեղում և մի գցեք այն մաքրման սյունակի օղակի վրա:

5. Բուֆեր RW2-ին չի ավելացվել բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը:

Առաջարկ. Խնդրում ենք հետևել հրահանգներին, ավելացնել բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը Buffer RW2-ին և լավ խառնել նախքան հավաքածուն օգտագործելը:

6. Անհամապատասխան նմուշի ծավալ:

Առաջարկ. Բուֆերային DRL-ի յուրաքանչյուր 500 մկլ-ի համար մշակվում է 200 մկլ նմուշ:Նմուշի չափից ավելի մշակումը կհանգեցնի նուկլեինաթթվի արդյունահանման ավելի ցածր եկամտաբերությանը:

7. Էլյուցիայի ոչ պատշաճ ծավալը կամ թերի էլյուցիան:

Առաջարկություն. Մաքրման սյունակի էլուենտի ծավալը 30-50 մկլ է;եթե էլյուցիոն ազդեցությունը գոհացուցիչ չէ, խորհուրդ է տրվում երկարացնել ժամանակը սենյակային ջերմաստիճանում՝ նախապես տաքացված RNase-Free ddH2O ավելացնելուց հետո, օրինակ՝ 5-10 րոպե:

8. Բուֆեր RW2-ով լվանալուց հետո էթանոլը մնում է սյունակի վրա:

Առաջարկ. Եթե բուֆեր RW2-ով ցենտրիֆուգելուց հետո էթանոլը մնա 2 րոպե, ապա սյունը ցենտրիֆուգումից հետո 5 րոպե կարող է տեղադրվել սենյակային ջերմաստիճանում՝ մնացորդային էթանոլը լիովին հեռացնելու համար:

Մաքրված նուկլեինաթթուն քայքայվում է

Մաքրված նուկլեինաթթվի որակը կապված է նմուշի պահպանման, RNase աղտոտվածության, շահագործման և այլ գործոնների հետ:Ընդհանուր պատճառների վերլուծություն.

1. Հավաքված նմուշները ժամանակին չեն պահպանվել։

Առաջարկ. Եթե նմուշը հավաքելուց հետո ժամանակին չի օգտագործվում, խնդրում ենք անմիջապես պահել այն -80°C ցածր ջերմաստիճանում:ՌՆԹ արդյունահանման համար փորձեք օգտագործել թարմ հավաքված նմուշներ:

2. Հավաքեք նմուշներ և մի քանի անգամ սառեցրեք և հալեցրեք:

Առաջարկ. Նմուշների հավաքման և պահպանման ժամանակ խուսափել սառչելուց և հալվելուց (ոչ ավելի, քան մեկ անգամ), հակառակ դեպքում նուկլեինաթթվի պարունակությունը կնվազի:

3. RNase ներմուծվում է վիրահատարանում կամ չեն կրում միանգամյա օգտագործման ձեռնոցներ, դիմակներ և այլն։

Առաջարկություն. ՌՆԹ արդյունահանման փորձերը լավագույնս կատարվում են ՌՆԹ-ի առանձին վիրահատության սենյակում, իսկ լաբորատոր սեղանը պետք է մաքրվի փորձից առաջ:

Փորձի ընթացքում կրեք միանգամյա օգտագործման ձեռնոցներ և դիմակներ, որպեսզի խուսափեք ՌՆԹ-ի քայքայումից, որն առաջանում է RNase-ի առավելագույն չափով:

4. Օգտագործման ընթացքում ռեագենտը աղտոտվել է RNase-ով:

Առաջարկություն. Փոխարինեք վիրուսային ԴՆԹ/ՌՆԹ-ի մեկուսացման նոր հավաքածուով համապատասխան փորձերի համար:

5. ՌՆԹ-ի մանիպուլյացիայի համար օգտագործվող ցենտրիֆուգային խողովակները և խողովակների ծայրերը աղտոտված են RNase-ով:

Առաջարկություն. Համոզվեք, որ ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար օգտագործվող ցենտրիֆուգային խողովակները, խողովակների ծայրերը, պիպետները և այլն, բոլորն էլ առանց RNase-ի են:

Մաքրված նուկլեինաթթուն ազդում է ներքևում գտնվող փորձերի վրա

ԴՆԹ-ն և ՌՆԹ-ն, որոնք մաքրվում են մաքրման սյունակով, եթե աղի իոնների և սպիտակուցների պարունակությունը չափազանց բարձր է, դա կազդի ներքևի փորձերի վրա, ինչպիսիք են՝ PCR ուժեղացումը, հակադարձ տրանսկրիպցիան և այլն:

1. Էլյուտավորված ԴՆԹ-ն և ՌՆԹ-ն ունեն աղի մնացորդային իոններ:

Առաջարկ. Համոզվեք, որ բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը ավելացված է բուֆերային RW2-ին և մաքրման սյունը երկու անգամ լվացեք գործառնական հրահանգներում նշված ցենտրիֆուգման արագությամբ.Կատարեք ցենտրիֆուգում՝ աղի իոնների աղտոտումը նվազագույնի հասցնելու համար:

2. Էլյուտավորված ԴՆԹ-ն և ՌՆԹ-ն ունեն էթանոլի մնացորդներ:

Առաջարկություն. Բուֆեր RW2-ով լվացումը հաստատելուց հետո կատարեք դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգում՝ գործառնական հրահանգներում նշված ցենտրիֆուգման արագությամբ;եթե դեռ կա էթանոլի մնացորդ, դուք կարող եք ցենտրիֆուգել դատարկ խողովակը և այն 5 րոպե դնել սենյակային ջերմաստիճանում՝ էթանոլի մնացորդը առավելագույն չափով հեռացնելու համար:

Հրահանգների ձեռնարկներ.

Վիրուսային ԴՆԹ&ՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուի հրահանգների ձեռնարկ