Խորհուրդներ սոսինձի վերականգնման բարելավման համար

1. Էլեկտրաֆորեզի ժամանակ մեծացրեք նմուշի բեռը:

2. Օգտագործեք թարմ պատրաստված էլեկտրոֆորեզի բուֆեր:

3. Սոսինձը կտրելիս աշխատեք շերտերով կտրել միայն սոսինձը՝ սոսինձի կտրման ծավալը նվազեցնելու համար. քիչ նպատակային բեկորներով սոսինձ պետք չէ, հակառակ դեպքում դա կազդի վերականգնման արագության վրա:

4. Երկու կամ ավելի կտոր սոսինձը հալեցնելուց հետո օգտագործեք խողովակ, անկախ նրանից, թե որքան մեծ է ծավալը և տեղափոխեք այն նույն սյունին։

5. Սոլում ավելացված լուծույթը կարող է մի փոքր ավելի շատ լինել, որն ավելի նպաստավոր է ԴՆԹ-ի մեմբրանի հետ կապելու համար, բայց ընդհանուր առմամբ չի գերազանցում 750ուլ-ը։

6. Գելի վերականգնման բանալին ԴՆԹ-ին սյունակին կապելն է սյունակում առկա լուծույթի աղի կոնցենտրացիայի, թթվայնության (լիցքի) և հիդրոֆոբության միջոցով:Հետևաբար, եթե էլեկտրոֆորեզի բուֆերի pH-ը չափազանց բարձր է, ապա լուծույթին կարող է ավելացվել 10ուլ (pH 5.0, 3mol/L NaAC);Մեմբրանի վրա ԴՆԹ-ի մոլեկուլները ավելի լավ ընդհատելու համար 30% իզոպրոպանոլ կարող է ավելացվել՝ սոսինձը լուծելուց հետո հեղուկի մեջ տաքացնելու համար:

7. Նախքան էլյուենտ ավելացնելը, սյունը թողեք սենյակային ջերմաստիճանում մի քանի րոպե (մոտ 10 րոպե), որպեսզի էթանոլը լիովին գոլորշիացվի:

8. Ի վերջո, ավելացրեք ավելի քիչ էլյուենտ՝ վերականգնման ծավալը նվազագույնի հասցնելու համար:Ընդհանրապես, 30-50 մկլ էլյուենտ է օգտագործվում (ոչ շատ քիչ, հակառակ դեպքում այն ​​չի կարողանա թրջել թաղանթը, որը չի նպաստում էլյուցիայի);Էլյուցիոն կաթիլները գտնվում են մեմբրանի կենտրոնում՝ թաղանթին կապված ԴՆԹ-ն ամբողջությամբ մաքրելու համար:

9. Էլյուենտը ավելացնելուց հետո այն կարելի է 5 րոպե ողողել 55 աստիճան ջրային բաղնիքում կամ 10 րոպեից ավելի դնել 50 աստիճան ջրային բաղնիքում, կամ փակել պարաֆիլմով 4 աստիճանով գիշերը, իսկ հետո ցենտրիֆուգել՝ հաջորդ օրը վերականգնելու համար, ազդեցությունը լավ է։

10. Ցենտրիֆուգված լուծույթը նորից ավելացրեք կլանման սյունակում և նորից ցենտրիֆուգեք:

PCR արտադրանքի վերականգնման մանրամասն մեթոդներ և ընթացակարգեր

1. Սովորական կաուչուկի վերամշակում

Եթե ​​ցանկանում եք վերականգնել սոսինձը, ապա ավելի լավ է օգտագործել լրակազմ, որը հարմար է և ունի մի փոքր ավելի բարձր վերականգնման արագություն:Եթե ​​Ձեզ իսկապես անհրաժեշտ է ձեռքով վերականգնել այն, ապա սոսինձը կտրելուց հետո կարող եք ավելացնել TE-ի ծավալը 3 անգամ:Ջրային բաղնիքում հալվելուց հետո ֆենոլը, ֆենոլը/քլորոֆորմը մաքուր կերպով արդյունահանվում են, և էթանոլը նստում է:վերջ։

2. ԴՆԹ-ի վերականգնում ցածր հալման կետից գելերից

ԴՆԹ-ի բեկորների մաքրում Ավելացնել TE (10 մմոլ/լ Tris-HCl pH8.0, 0.1 մմոլ/լ EDTA) հավասար գելի ծավալին և 5 րոպե դնել 65°C ջրային բաղնիքում, որպեսզի գելը ամբողջությամբ լուծարվի:

Այն սենյակային ջերմաստիճանի հասցնելուց հետո ավելացվել է հավասար քանակությամբ ֆենոլ (հագեցած TE-ով, TE-ն փակվել է վերին շերտում, իսկ ֆենոլի ստորին շերտը հանվել) ավելացվել է, և խառնուրդը նրբորեն խառնվել է (խառնուրդ չի պահանջվում) և ցենտրիֆուգվել 12000 rpm-ով 3 րոպե:Կրկնել 1-2 անգամ։

Վերցրեք վերին նյութը, ավելացրեք 0,1 ծավալ 3 մոլ/լ նատրիումի ացետատ (pH 5,2) և բացարձակ էթանոլի ծավալի 2,5 անգամ՝ էթանոլային նստեցում իրականացնելու համար:Մաքրված ԴՆԹ-ն լուծարեք համապատասխան քանակությամբ TE-ով, չափեք պարունակությունը և պատրաստվեք օգտագործման համար (այն կարող է օգտագործվել թիրախային գենի կառուցվածքի վերլուծության, զոնդի պատրաստման և այլնի համար):

3. PCR վերականգնում լավ ուժեղացման առանձնահատկությունով

Եթե ​​PCR ուժեղացման առանձնահատկությունը լավ է, ապա դա պարզապես PCR արտադրանքի պարզ մաքրում և վերականգնում է:Դուք կարող եք PCR արտադրանքին ավելացնել 50 մգ/մլ պրոտեինազ K, 37 աստիճան ջերմաստիճանում 1 ժամվա ընթացքում, մեկ անգամ արդյունահանել ֆենոլով/քլորոֆորմով, մեկ անգամ քլորոֆորմով արդյունահանել և ավելացնել 0,1 ծավալ ավելորդ նյութ:Նատրիումի ացետատը վերականգնվել է տեղումների միջոցով 2,5 ծավալ բացարձակ էթանոլով:

Առնչվող ապրանքներ.

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/