Ներածություն:

ՌՆԹ, գիտական ​​անվանումը՝ ռիբոնուկլեինաթթու, նրա հապավումը գալիս է RiboNucleic Acid-ից, նուկլեինաթթվի տեսակ է, որը ձևավորվում է առնվազն տասնյակ ռիբոնուկլեոտիդներ միացնելով ֆոսֆոդիստերային կապերի միջոցով։

ՌՆԹ-ի հետազոտության նախադրյալը աղտոտվածությունից զերծ ընդհանուր ՌՆԹ-ի արդյունահանումն է, և ՌՆԹ-ի արդյունահանման հիմնական սկզբունքը կարելի է մոտավորապես ամփոփել հետևյալ կերպ.

1. Նախ խաթարեք բջիջները

2. Այնուհետև հեռացրեք մակրոմոլեկուլային կեղտերը (սպիտակուցներ, լիպիդներ, ԴՆԹ և այլն):

3. Ի վերջո, ՌՆԹ-ն նստեցվում է աղերն ու օրգանական լուծիչները հեռացնելու և ՌՆԹ-ն հետագա մաքրման ընթացքում:

Արդյունահանման մեթոդի անցյալն ու ներկան

ՌՆԹ-ի արդյունահանման մեթոդի առաջին սերունդը ՏՐԻզոլ տեղումների մեթոդն է (օգտագործվող ռեագենտները ներառում են գուանիդին իզոթիոցիանատ, ֆենոլ, քլորոֆորմ և այլն), որը հորինել են պապ Պյոտր Չոմչինսկին և տատիկ Նիկոլետտա Սաչին, քանի որ այս գյուտը թույլ է տալիս ՌՆԹ-ի արդյունահանումը արագ և հեշտ, այն ժամանակից ի վեր սկսվել է ՌՆԹ-ի հետազոտությունը:

Ավելի ուշ պապիկը վաճառեց այս արտոնագիրը Invitrogen-ին, և Invitrogen-ը այս մեթոդը տարածեց աշխարհին և դարձավ լայնորեն կիրառվող մեթոդ:

Ավելի ուշ Invitrogen-ը ձեռք բերվեց Thermo!

Ներկայացուցչական արտադրանք՝ Invitrogen-ի ՏՐԻզոլ ռեագենտ

Այնուամենայնիվ, TRIzol տեղումների մեթոդը պահանջում է բազմակի տեղումներ և RNA-ի արդյունահանում, իսկ օգտագործվող ռեակտիվները թունավոր են և երկար ժամանակ են պահանջում գործելու համար:

Հետևաբար, ստեղծվեց երկրորդ սերնդի սյունակ-ֆերմենտային մաքրման մեթոդը՝ օգտագործելով սիլիկագելային թաղանթ՝ որպես հատուկ նուկլեինաթթվի կլանման նյութ՝ նմուշում ՌՆԹ-ի վերականգնումը առավելագույնի հասցնելու համար՝ միաժամանակ հեռացնելով այլ կեղտեր:

Երկրորդ սերնդի մեթոդը պարզեցնում է աշխատանքը կայուն կատարողականի հիման վրա, նվազեցնում է ռիսկի գործոնը և բարելավում ՌՆԹ-ի արդյունահանման արդյունավետությունը:

Ներկայացուցչական արտադրանք՝ QIAGEN RNeasy և ներքին արտադրանքի մեծ մասը

Այնուամենայնիվ, և՛ առաջին, և՛ երկրորդ սերնդի մեթոդները պահանջում են DNase-ի օգտագործումը ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը հեռացնելու համար, ինչը որոշակի անհարմարություններ է առաջացնում հետագա ներքևի փորձերի համար:Մնացորդային DNase-ը կնվազեցնի հակադարձ տրանսկրիպցիայի արդյունավետությունը և կնվազեցնի առաջին շղթայի cDNA-ի սինթեզը՝ դրանով իսկ ազդելով արդյունքների ճշգրտության վրա:

Հետևաբար, երրորդ սերնդի արդյունահանման մեթոդը օպտիմիզացված է երկրորդ սերնդի հիման վրա:Փորձին անհրաժեշտ չէ որևէ ֆերմենտ ավելացնել, և ՌՆԹ-ն հեշտությամբ կարելի է ստանալ միայն երկու սյունակով:

Սյունակ 1. ԴՆԹ-ի մաքրման սյունակ՝ ԴՆԹ-ն մաքրելու համար

Սյունակ 2. միայն ՌՆԹ-ով Սյունակը հատուկ կլանում և վերականգնում է ՌՆԹ-ն

Նման պարզ գործողությունը ոչ միայն խնայում է ժամանակը, այլև հեշտացնում է ներքևում գտնվող փորձերի աշխատանքը:

Ներկայացուցչական արտադրանք՝ QIAGEN RNeasy Plus ևForegeneՌՆԹ մաքրման սերիայի արտադրանք

(RNeasy Plus)

(Foregene-իԲույսերի ընդհանուր ՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու)

Ասա քեզ հանգիստ!Foregene-ի RNA հավաքածուն ներկայացնում է նաև գերհեշտ օգտագործվող RNase ռետին, որը կարող է ամբողջությամբ հեռացնել 400 մկգ RNase պինդ մակերեսի վրա 1 րոպեում, առանց որևէ թունավոր նյութ ավելացնելու մարդու մարմնին:

նկ1. Գործառնական գործընթացի համեմատական ​​աղյուսակ

Foregene-ի արտադրանքը կարող է ավարտել ՌՆԹ-ի արդյունահանումը ընդամենը երկու երգով, մի ստիպեք ուրիշներին նախանձել ձեր փորձի առաջընթացին:

նկ2:Eփորձարարական արդյունքներ համեմատական ​​աղյուսակ

Առաջին սերունդ (1: TRIzol)

Երկրորդ սերունդ (2: QIAGEN-ի RNeasy)

Երրորդ սերունդ (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

նկ3: qPCR գրաֆիկ (ուժեղացման կորի գրաֆիկ)

Առաջին սերունդ (կանաչը նշանակում է TRIzol -, կարմիրը նշանակում է TRIzol +)

Երկրորդ սերունդ (երկնագույնը նշանակում է QIAGEN RNeasy-, կարմիրը նշանակում է QIAGEN RNeasy +)

Երրորդ սերունդ (կապույտը նշանակում է QIAGEN RNeasy plus, կանաչը նշանակում է Foregene)

(Ծանոթագրություն. qPCR «-» գրաֆիկը ցույց է տալիս, որ DNase-ը չի ավելացվել, և ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը չի հեռացվել: Հետևաբար, CT-ն ավելի բարձր է, և արդյունքը ճշգրիտ չէ, «+»-ը ցույց է տալիս, որ DNase-ն ավելացվել է և ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը հեռացվել է, արդյունքը ճշգրիտ է):

Յուրաքանչյուր տեխնիկական արդիականացում նշանակում է, որ փորձի գործողությունը զարգանում է ավելի պարզ և օգտագործողի համար հարմար ուղղությամբ:

Foregene-ը նպատակ ունի օգնել ավելի շատ գիտական ​​հետազոտողների խնայել փորձարարական ժամանակը և ծախսերը, ձեռք բերել բարձրորակ փորձարարական արդյունքներ և համատեղ ստեղծել ավելի արժեքավոր գիտահետազոտական ​​ձեռքբերումներ: