Հեղինակներ՝ Վան Սյաոյան, Ժաո Էրյու

Բաժանմունք՝ Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital, որը կից է Tongji համալսարանին

Ներկայումս շնչառական պաթոգեն նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հիմնական նմուշը կոկորդային շվաբրն է:Կան բազմաթիվ տեսակի սովորաբար օգտագործվող նմուշների պահպանման լուծույթներ, որոնք բոլորը պետք է սառեցվեն կամ սառեցվեն տեղափոխման և պահպանման համար.Դժվար է վերահսկել ցածր ջերմաստիճանի ողջ գործընթացը հավաքման և տեղափոխման գործընթացում, և դժվար է ապահովել որակի հսկողությունը նմուշի փորձարկումից առաջ:^[1-2].

RNase (RNase) էնդոնուկլեազ է, որը հիդրոլիզացնում է ՌՆԹ-ն՝ հիմնականում խզելով նուկլեոտիդների միջև ֆոսֆոդիստերային կապերը։RNase մոլեկուլը շատ կայուն է, կառուցվածքում կան դիսուլֆիդային կապեր, և դրա ակտիվությունը չի պահանջում երկվալենտ կատիոնների առկայություն, ուստի RNase-ը հեշտությամբ դենատուրացված չէ, և այն հեշտ է վերածվել նույնիսկ բարձր ջերմաստիճանից կամ դենատուրանտների օգտագործումից հետո:ՌՆազները բաժանվում են էնդոգեն և էկզոգենների։Էնդոգեն RNase-ները կարող են արձակվել միաժամանակ, երբ բջիջները պատռվում են:Հետևաբար, էնդոգեն RNase-ների դերի վերացումը շատ կարևոր քայլ է ՌՆԹ-ի արդյունահանման գործընթացում:Էկզոգեն ՌՆազները լայնորեն տարածված են:RNases գոյություն ունեն օդում, մարդու մաշկի, մազերի և թքի մեջ, որոնք կարևոր պատճառ են ՌՆԹ-ի հեշտ քայքայման համար:^[3].

Տվյալների հարցում

CANS-CL02-A009 «Բժշկական լաբորատորիայի որակի և իրավասության հավատարմագրման ուղեցույցների կիրառումը մոլեկուլային ախտորոշման ոլորտում» տեխնիկական պահանջներում առաջարկում է, որ ջրի որակի համապատասխան չափորոշիչները պետք է ձևակերպվեն հայտի համաձայն.Մեկանգամյա օգտագործման հերմետիկ տարաներ.

RNase/դասակարգում

(1) RNase A

Ռիբոնուկլեազ A-ն (RNase A), որը ստացվում է տավարի ենթաստամոքսային գեղձից, էնդորիբոնուկլեազ է, որը կարող է հատուկ հարձակվել ՌՆԹ-ի վրա պիրիմիդինի մնացորդների 3' ծայրի վրա՝ կտրելով հարակից նուկլեոտիդներից ձևավորված ցիտոսինը կամ ուրացիլը:Ֆոսֆոդիստերային կապ, ռեակցիայի վերջնական արդյունքը 3' պիրիմիդին նուկլեոտիդն է և օլիգոնուկլեոտիդը՝ վերջում 3' պիրիմիդին նուկլեոտիդով։

(2) RNase T1

Ռիբոնուկլեազ T1 (RNase T1) ստացվում է Aspergillus orjzae-ից, այն հատուկ գործում է գուանինի 3'-տերմինալ ֆոսֆատի վրա, և տրոհման վայրը գտնվում է գուանինի 3' ֆոսֆատի և հարակից նուկլեոտիդների 5' հիդրոքսիլի միջև:Ռեակցիայի վերջնական արդյունքը 3'guanylic թթու և օլիգոնուկլեոտիդային բեկորներ են, որոնց վերջում կա 3'guanylic թթու:

(3) RNase H

Ռիբոնուկլեազ H (RNase H) առաջին անգամ հայտնաբերվել է հորթի թիմուսի հյուսվածքից, և դրա կոդավորող գենը կլոնավորվել է Escherichia coli-ում:Այն կարող է հատուկ քայքայել ԴՆԹ-ն. ՌՆԹ-ի շղթաները ՌՆԹ-ի հիբրիդային դուպլեքսներում, որի արդյունքում առաջանում են օլիգոնուկլեոտիդներ և մոնոնուկլեոտիդներ 3'-OH և 5'-մոնոֆոսֆատ ծայրերով, այն չի կարող քայքայել մեկ կամ երկշղթա ԴՆԹ-ն կամ ՌՆԹ-ն:

RNase

Գործառույթ և օգտագործում

Ռիբոնուկլեազը կարող է կատալիզացնել ռիբոնուկլեինաթթվի (ՌՆԹ) քայքայումը և կարող է արհեստականորեն սինթեզվել։Դեղորայքային քսուքն օգտագործվում է տեղային՝ վնասվածքների և հոդացավերի բուժման համար։Ըստ զեկույցների, ռիբոնուկլեազը կարող է փոխել հյուրընկալող բջիջների նյութափոխանակությունը, արգելակել վիրուսի սինթեզը, արգելակել գրիպի վիրուսի տարածումը in vitro և արգելակել վակցինիայի և հերպեսի վիրուսի ձևավորումը հավի սաղմերում:Ռիբոնուկլեազի ամենօրյա 180 մգ ներմկանային ներարկումների կլինիկական օգտագործումը, որը օգտակար է համաճարակային էնցեֆալիտի բուժման համար, ռիբոնուկլեազը կարող է կատալիզացնել ռիբոնուկլեինաթթվի (ՌՆԹ) քայքայումը և այժմ կարող է արհեստականորեն սինթեզվել:Դեղորայքային քսուքն օգտագործվում է տեղային՝ վնասվածքների և հոդացավերի բուժման համար։Ըստ զեկույցների, ռիբոնուկլեազը կարող է փոխել հյուրընկալող բջիջների նյութափոխանակությունը, արգելակել վիրուսի սինթեզը, արգելակել գրիպի վիրուսի տարածումը in vitro և արգելակել վակցինիայի և հերպեսի վիրուսի ձևավորումը հավի սաղմերում:Ռիբոնուկլեազի ամենօրյա 180 մգ ներմկանային ներարկման կլինիկական օգտագործումը օգտակար է համաճարակային էնցեֆալիտի բուժման համար:

RNase

Ինհիբիտորի սահմանում

RNase inhibitor միավորի սահմանումը. 5ng RNase A-ի ակտիվության 50%-ը արգելակելու համար պահանջվող ֆերմենտի քանակը մեկ միավոր է:

Ինչպես են աշխատում RNase ինհիբիտորները

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate-ը օրգանական միացություն է C2H6N4S մոլեկուլային բանաձեւով:Հիմնականում օգտագործվում է կենսաբանական բժշկության մեջ, քիմիական ռեակտիվներում և այլն: Գուանիդինի իզոթիոցիանատը սպիտակուցի լուծիչ նյութ է և հաճախ օգտագործվում է որպես լիզի լուծույթի հիմնական բաղադրիչ մոլեկուլային ախտորոշիչ ռեագենտներում:Այն կարող է լիզել հյուսվածքը, ոչնչացնել բջիջների կառուցվածքը և տարանջատել նուկլեինաթթուն նուկլեոպրոտեինից և ունի ուժեղ դենատուրացիա դեպի RNase:Այն ներկայումս ամենաարդյունավետ RNase ինհիբիտորն է:

ՏՐԻզոլը նոր ընդհանուր ՌՆԹ-ի արդյունահանման ռեագենտ է, որը կարող է ուղղակիորեն արդյունահանել ընդհանուր ՌՆԹ բջիջներից կամ հյուսվածքներից:Այն պարունակում է այնպիսի նյութեր, ինչպիսիք են ֆենոլը և գուանիդին իզոթիոցիանատը, որոնք կարող են արագորեն խաթարել բջիջները և արգելակել բջիջների կողմից թողարկվող նուկլեազները:

(Սակայն, գուանիդինի իզոթիոցիանատը վտանգավոր է լաբորատոր հետազոտողների առողջության համար):

RNasin:

Թթվային գլիկոպրոտեին՝ արդյունահանված առնետի լյարդից կամ մարդու բլաստոդերմից։Rnasin-ը RNase-ի ոչ մրցակցային արգելակիչ է, որը կարող է կապվել տարբեր RNase-ների հետ՝ դրանք ապաակտիվացնելու համար:

(Լրացուցիչ մանրամասներ. https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hբարձր ջերմաստիճան:

Բարձր ջերմաստիճանը նույնպես սպիտակուցների դենատուրացիայի տարածված միջոց է։

Դիէթիլպիրոկարբոնատ (DEPC):

DEPC-ն ուժեղ, բայց ոչ լիարժեք RNase արգելակիչ է, որը կարող է արգելակել RNase-ի ակտիվությունը՝ միավորվելով RNase ակտիվ խմբի ամինաթթվի իմիդազոլ օղակի հետ՝ սպիտակուցները դենատուրացնելու համար:

Վանադիլ ռիբոնուկլեոզիդային համալիր.

Վանադիումի օքսիդի իոնների և նուկլեոզիդների կողմից ձևավորված բարդույթ, որը միանում է RNase-ին անցումային նյութերի տեսքով, ինչը կարող է գրեթե ամբողջությամբ արգելակել RNase-ի ակտիվությունը։

այլ:

RNase-ի վրա որոշակի արգելակող ազդեցություն ունեն նաև SDS, միզանյութը, դիատոմային հողը և այլն։

Փորձագիտական ​​ակնարկներ

Li Yujie գլխավոր տեխնիկ

Տոնգջի համալսարանին կից Դոնգֆանգ հիվանդանոցի Ջյաոժոու հիվանդանոցի լաբորատոր բաժանմունքի տնօրեն

Էկզոգեն RNase-ի կենսաքայքայումը կանխելու համար ՌՆԹ-ի արդյունահանման գործընթացում դիմակներ, ձեռնոցներ և գլխարկներ պետք է կրել և հաճախակի փոխարինել:Բոլոր ապակյա իրերը պետք է թխվեն չորացման ջեռոցում 200°C ջերմաստիճանում 2 ժամից ավելի:Թխելու համար օգտագործվող նյութերը, օրինակ՝ պլաստիկը, պետք է մշակվեն DEPC ջրով, այնուհետև լվացվեն թորած ջրով:ՌՆԹ-ի արդյունահանման, պահպանման և նույնականացման համար օգտագործվող ռեակտիվները կամ սարքերը պետք է նվիրված լինեն ՌՆԹ-ին և ստեղծվի ՌՆԹ-ի աշխատանքի անկախ տարածք:

հղումներ:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Բակտերիաներ և վիրուսներ քիթ-կոկորդում գտնվող բնիկ ավստրալացի երեխաների մոտ ստորին շնչուղիների սուր վարակների առաջացումից անմիջապես առաջ [J]:Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018,37 (9): 1785-1794:

[2] Չինական կանխարգելիչ բժշկության ասոցիացիայի հիվանդանոցային վարակների վերահսկման մասնաճյուղ:Կլինիկական մանրէաբանական նմուշների հավաքման և ստուգման ուղեցույցներ [J]:Հիվանդանոցային վարակի չինական ամսագիր, 2018 (20): 3192-3200:

[3] «Կլինիկական թեստ տասը հազար ինչու մոլեկուլային կենսաբանության թեստի ծավալ»