Հնարավոր խնդիրների հետևյալ վերլուծությունըԲուկալշվաբր/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Մաքրման սյունը խցանված է

Այս փաթեթում, գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման գործողության մեջ, մաքրման սյունակը ուղղակիորեն կլանվում է նմուշի ֆերմենտային լիզի խառնուրդի վրա՝ առանց ցենտրիֆուգման փուլի, և մաքրման սյունը կարող է արգելափակվել թերի ֆերմենտացման և նմուշի բարձր մածուցիկության պատճառով:

Հետևյալ հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Հյուսվածքների նմուշների ոչ ամբողջական ֆերմենտային մարսողություն:

Առաջարկություն. Foregene Protease-ի նմուշի մշակման ժամանակը կարող է պատշաճ կերպով երկարաձգվել կամ վերին նյութը կարող է վերցվել ցենտրիֆուգումից հետո 12,000 rpm (~13,400):× է) 5 րոպե.

2. Հյուսվածքների նմուշների կամ մեծ հյուսվածքների չափից ավելի օգտագործումը:

Առաջարկություն. Ավելի լավ է չգերազանցել 1-ըԲուկալ շվաբր նմուշի մեջ;եթե նմուշը չափազանց մեծ է, համապատասխանաբար ավելացրեք բուֆեր ST1, Foregene Protease, բուֆեր ST2 դեղաչափը:

3. Նմուշի մածուցիկությունը չափազանց բարձր է:

Առաջարկություն. Նախքան գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանումը, նմուշները կարող են պատշաճ կերպով նոսրացնել 10 մՄ տրիս-HCl-ով:

4. Արյան քարտի բեկորներ են ծծվել։

Առաջարկություն. Արյան բծերի (FTA Card) գենոմային արդյունահանման 6-րդ քայլի անցողիկ ցենտրիֆուգման ժամանակը կարող է համապատասխան կերպով երկարաձգվել:

Ցածր եկամտաբերություն կամ ԴՆԹ-ի բացակայություն

Հաճախ կան մի շարք գործոններ, որոնք ազդում են գենոմային ԴՆԹ-ի վրա, ներառյալ նմուշի ծագումը, նմուշների պահպանման պայմանները, նմուշի պատրաստումը, մանիպուլյացիան և այլն:

Գենոմային ԴՆԹ-ն հնարավոր չէ ստանալ արդյունահանման ժամանակ

Հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Նմուշների ոչ պատշաճ պահպանումը կամ չափազանց երկար պահպանումը հանգեցնում է գենոմի ԴՆԹ-ի քայքայման:

Առաջարկություն. Բերանի շվաբրերը գերադասելի է թարմ նմուշառել, և խորհուրդ չի տրվում օգտագործել պահածոյացված շվաբրեր՝ գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման գործողությունների համար.արյան բծերի նմուշները պետք է ապահովեն որակի որակը, և պահպանման ժամկետը չպետք է չափազանց երկար լինի:

2. Հյուսվածքների չափազանց քիչ օգտագործումը կարող է հանգեցնել համապատասխան գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման:

Առաջարկություն. Հետևեքbuccaլ շվաբրի նմուշառման հրահանգները գործառնական ուղեցույցում և սրբել որքան հնարավոր է շատ անգամ, որպեսզի բերանի շվաբրին կարողանան ամրացնել գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար բավարար քանակությամբ բջիջներ.արյան բծի նմուշի արդյունահանման համար արյան բծի կտրման տարածքը կարող է համապատասխան կերպով մեծացնել:

3. Foregene Protease-ը ոչ պատշաճ կերպով պահպանվում է, ինչի հետևանքով նվազում է նրա ակտիվությունը կամ ապաակտիվացումը:

Առաջարկություն. Հաստատեք պահեստավորման պայմաններըոր Ֆoregene Protease կամ փոխարինել այն նոր Foregene Protease-ով ֆերմենտային ռեակցիայի համար:

4. Կոմպլեկտի սխալ պահպանումը կամ պահպանման ժամանակը չափազանց երկար է, ինչի հետևանքով հանդերձում որոշ բաղադրիչներ խափանվում են:

Առաջարկություն. Գնեք նորըԲուկալ շվաբր ԴՆԹմեկուսացում հանդերձանք հարակից ընթացակարգերի համար:

5. Բուֆերային ՀԲ-ն բացարձակ էթանոլ չի ավելացնում:

Առաջարկություն. Հաստատեք, որ բուֆերային WB-ն ավելացնում է բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը:

6. Էլյուենտը ճիշտ չի ավելացվել սիլիկոնե թաղանթին:

Առաջարկություն՝ ավելացնել 65°Cնախապես տաքացված էլյուենտը ընկնում է սիլիկոնե թաղանթի կեսին և թողնում սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե, որպեսզի բարձրացվի լուծույթի արդյունավետությունը:

Low-yield գենոմային ԴՆԹ մեկուսացված

Հետևյալ հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Նմուշների ոչ պատշաճ պահպանումը կամ չափազանց երկար պահպանումը հանգեցնում է գենոմի ԴՆԹ-ի քայքայման:

Առաջարկություն. Բերանի շվաբրերը նախընտրելի է թարմ նմուշառել, և պահպանված շվաբրերը չպետք է օգտագործվեն գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար:

2. Եթե հյուսվածքի նմուշի քանակը չափազանց փոքր է, արդյունահանված գենոմային ԴՆԹ-ի պարունակությունը ավելի քիչ կլինի:

Առաջարկություն. Հետևեք գործառնական ուղեցույցում բերված շվաբրի նմուշառման ցուցումներին՝ հնարավորինս շատ անգամ սրբելով, որպեսզի բերանի շվաբրին կարողանան ամրացնել գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար բավարար քանակությամբ բջիջներ:

3. Foregene Protease-ը ոչ պատշաճ կերպով պահպանվում է, ինչի հետևանքով նվազում է նրա ակտիվությունը կամ ապաակտիվացումը:

Առաջարկություն. Հաստատեք պահեստավորման պայմաններըthe Foregene Protease կամ փոխարինել այն նորով Foregene Protease ֆերմենտային ռեակցիայի համար:

4. Էլյուենտի խնդիրներ.

Առաջարկություն. Օգտագործեք բուֆերային EB էյուցիայի համար;եթե օգտագործում եք ddH₂O կամ այլ էլուենտներ, հաստատեք, որ լուծույթի pH-ը գտնվում է 7,0-8,5 միջակայքում:

5. Էլուատը ճիշտ չի ավելացվել կաթիլային եղանակով:

Առաջարկություն. Ավելացրեք էլուենտի կաթիլներ սիլիկոնե թաղանթի մեջտեղում և թողեք սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե՝ զտման արդյունավետությունը բարձրացնելու համար:

6. Էլյուցիոն հեղուկը շատ քիչ է կուտակվում։

Առաջարկություն. Օգտագործեք էլուենտ գենոմային ԴՆԹ-ի զտման համար, ինչպես պահանջվում է հրահանգներում, առնվազնոչ պակաս քան 15μl.

Lօ՜յ մաքրություն of գենոմային ԴՆԹմեկուսացված

Ցածր գենոմային ԴՆԹ-ի մաքրությունը կարող է հանգեցնել ներքևում գտնվող փորձերի ձախողման կամ անբավարար արդյունքների, ինչպիսիք են.

Հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Հետերոպրոտեինային աղտոտում, ՌՆԹ-ի աղտոտում:

Վերլուծություն. մաքրման սյունը չի լվացվել բուֆերային PW-ի միջոցով;Buffer PW լվացման մաքրման սյունակը չի լվացվել՝ օգտագործելով ճիշտ կենտրոնախույս արագությունը:

Առաջարկություն. Էթանոլ ավելացնելուց առաջ համոզվեք, որ վերին հեղուկում տեղումներ չկան.համոզվեք, որ լվացեք մաքրման սյունը հրահանգների համաձայն, և այս քայլը չի ​​կարող բաց թողնել:

2. Կեղտոտ իոնային աղտոտում.

Վերլուծություն. Բուֆերային WB լվացման մաքրման սյունակը բաց է թողնվել կամ լվացվել է միայն մեկ անգամ, ինչը հանգեցրել է մնացորդային իոնային աղտոտման:

Առաջարկություն. Համոզվեք, որ լվացեք Buffer WB-ն 2 անգամ, ինչպես նշված է, մնացորդային իոնները հնարավորինս հեռացնելու համար:

3. ՌՆԹ ֆերմենտային աղտոտում:

Վերլուծություն. օտարերկրյա RNase-ները ավելացվել են բուֆերին;Բուֆերային PW-ի լվացման գործողությունը սխալ էր, ինչը հանգեցրեց RNase-ի մնացորդներին, որոնք ազդում էին ՌՆԹ-ի ներքևի փորձարարական գործողությունների վրա, ինչպիսիք են in vitro արտագրումը:

Առաջարկություն՝ Foregene շարքի նուկլեինաթթուisolation փաթեթները կարող են հեռացնել ՌՆԹ-ն առանց RNase-ի լրացուցիչ ավելացման,այսպիսով բուկալային շվաբր/FTA քարտի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուանհրաժեշտ է't ավելացնել RNase;Համոզվեք, որ հետևեք Buffer PW լվացման մաքրման սյունակի հրահանգներին, և այս քայլը չի ​​կարող բաց թողնել:

4. Էթանոլի մնացորդ:

Վերլուծություն. Բուֆերային WB-ն չի կատարել դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգացիա մաքրման սյունը լվանալուց հետո:

Առաջարկություն. Կատարեք ճիշտ դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգման գործողությունը՝ համաձայն հրահանգների:

5. Այլ կեղտոտ աղտոտում:

Վերլուծություն. Պահպանված նմուշները կամ հատուկ նմուշները չեն ենթարկվում նախնական մշակման:

Առաջարկություն. Մանրակրկիտ նախապես մշակեք նմուշը, ինչպես հրահանգված է: