PCR ռեակցիայի ակնառու առանձնահատկությունն ուժեղացման մեծ հզորությունն է և չափազանց բարձր զգայունությունը:PCR-ի կատարողականը և հայտնաբերման արդյունավետությունը բարելավելու համար մենք պարտավորվում ենք բարելավել PCR ուժեղացման կարողությունը և հայտնաբերման զգայունությունը, սակայն գլխացավը փորձարկման գործընթացում է:Կեղծ դրական արդյունքներ հաճախ են տեղի ունենում, և շատ փոքր քանակությամբ նմուշների խաչաձև աղտոտումը կամ PCR արտադրանքի աղտոտումը կարող է առաջացնել կեղծ դրական արդյունքներ փորձի ժամանակ:
PCR արտադրանքի աղտոտման հինգ տեսակներ
PCR-ով վարակվելու բազմաթիվ պատճառներ կան, որոնք կարելի է մոտավորապես բաժանել հետևյալ կատեգորիաների.
Նմուշի աղտոտվածությունը հիմնականում պայմանավորված է նմուշը հավաքելու համար նախատեսված տարայի աղտոտվածությամբ, կամ երբ նմուշը տեղադրվում է, այն արտահոսում է տարայից՝ չամրացված փակման պատճառով, կամ նմուշը կպչում է տարայի արտաքին մասում, որն առաջացնում է խաչաձև աղտոտում.Աղտոտումը հանգեցնում է նմուշների աղտոտման.որոշ մանրէաբանական նմուշներ, հատկապես վիրուսները, կարող են տարածվել աերոզոլների հետ կամ ձևավորել աերոզոլներ՝ հանգեցնելով փոխադարձ աղտոտման:
Հիմնական պատճառն այն է, որ PCR ռեակտիվների պատրաստման ժամանակ նմուշի ատրճանակը, տարան, կրկնակի թորած ջուրը և այլ լուծույթները աղտոտվում են ՊՇՌ նուկլեինաթթվի կաղապարով:
Մոլեկուլային կենսաբանության լաբորատորիաներում և որոշ լաբորատորիաներում, որոնք օգտագործում են կլոնավորված պլազմիդներ որպես դրական հսկողություն, կլոնավորված պլազմիդային աղտոտման խնդիրը նույնպես տարածված է:Քանի որ կլոնավորման պլազմիդի պարունակությունը միավորի ծավալով բավականին մեծ է, և մաքրման գործընթացում ավելի շատ գործիքներ և ռեակտիվներ են անհրաժեշտ, և կենդանի բջիջներում պլազմիդը շատ հավանական է, որ աղտոտվի կենդանի բջիջների ուժեղ աճի և վերարտադրողական ունակության պատճառով:
Ընդլայնված արտադրանքի աղտոտումը PCR ռեակցիաներում ամենատարածված աղտոտման խնդիրն է:Քանի որ PCR արտադրանքի կրկնօրինակի քանակը մեծ է (ընդհանուր առմամբ 1013 օրինակ/մլ), որը շատ ավելի բարձր է, քան PCR հայտնաբերման պատճենների քանակի սահմանը, PCR արտադրանքի շատ փոքր քանակությամբ աղտոտվածությունը կարող է առաջացնել կեղծ դրական արդյունքներ:
Աերոզոլային աղտոտումը PCR արտադրանքի աղտոտման ամենահավանական ձևն է, և այն նաև ամենահեշտն է անտեսվել:Այն ձևավորվում է հեղուկի մակերեսի և օդի միջև շփման արդյունքում:Ընդհանուր առմամբ, աերոզոլային աղտոտումը կարող է առաջանալ, երբ կափարիչը բացվում է, երբ նմուշը ներծծվում է կամ նույնիսկ, երբ ռեակցիայի խողովակը ուժեղ թափահարում է:Ըստ հաշվարկների՝ աերոզոլային մասնիկը կարող է պարունակել 48000 օրինակ, ուստի դրա պատճառած աղտոտումը հատուկ ուշադրության արժանի խնդիր է։
Մասնավորապես, փորձարկման լաբորատորիաները հաճախ օգտագործում են նույն զույգ պրայմերները որոշակի գենի փորձարկման համար:Ժամանակի ընթացքում լաբորատոր տարածքում մեծ քանակությամբ PCR արտադրանքի աղտոտում տեղի կունենա:Երբ նման աղտոտումը տեղի է ունենում, դժվար է այն վերացնել կարճ ժամանակում:
Աղտոտման առաջին երեք տեսակների դեպքում մենք կարող ենք խուսափել արդյունավետ միջոցներից, սակայն PCR արտադրանքի պատճառով առաջացած աղտոտումը դժվար է կանխել, հատկապես ոչ ստանդարտ PCR լաբորատորիաների կառուցման ժամանակ:PCR գործընթացում, երբ պիպետտի ծայրը ծծում և փչում է հեղուկը, և PCR խողովակի ծածկը բացվում է, աերոզոլ է ձևավորվում:Աերոզոլով տեղափոխվող ԴՆԹ-ի մոլեկուլները (մեկ աերոզոլը կարող է տասնյակ հազարավոր ԴՆԹ կրել) դժվար է վերացնել, քանի որ դրանք լողում են օդում։Երբ PCR-ի փորձերի հաջորդ փուլը ներկայացվի, կեղծ պոզիտիվները անխուսափելիորեն կհայտնվեն:
Ինչպես ցույց է տրված ստորև նկարում, բացասական վերահսկողությունը նաև մեծացրել է համապատասխան հետաքրքրության շրջանակը.
PCR աղտոտման և կանխարգելման այս թողարկման առաջին մասը ներկայացված է այստեղ:Հաջորդ թողարկումը ձեզ կներկայացնի «PCR արտադրանքի աղտոտման կանխարգելում» երկրորդ մասը, այնպես որ մնացեք լարված:
Հրապարակման ժամանակը` Հուլիս-25-2017
