1: Ժամանակին փոխարինեք փորձնական նյութերը

Սահմանեք (NTC) բացասական հսկողությունը և կրկնեք այն բազմիցս:Երբ պարզվի, որ լաբորատորիայում կա PCR արտադրանքի աղտոտվածություն, ժամանակին փոխարինեք բոլոր փորձարարական պարագաները:Օրինակ՝ նորից նոսրացնել և պատրաստել պրայմերները, նորից մանրէազերծել պիպետտի ծայրը, EP խողովակը, ddH2O և այլն, փոխարինել նոր պիպետտով և ժամանակավորապես վերցնել այլ լաբորատորիաներ՝ PCR փորձեր կատարելու համար:Աղտոտված լաբորատորիան պետք է օդափոխվի և ճառագայթվի ուլտրամանուշակագույն ճառագայթներով, մինչև PCR արտադրանքի աղտոտվածությունը վերանա, նախքան փորձին անցնելը:

2: Երկարացնել ուլտրամանուշակագույն ճառագայթման ժամանակը

Հարկ է նշել, որ ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը հեռացնելու համար կանոնավոր ուլտրամանուշակագույն ճառագայթումը պետք է երկարաձգվի սովորականից 2 ժամով:Այնուամենայնիվ, ուլտրամանուշակագույն ճառագայթման ազդեցությունը ԴՆԹ-ի աղտոտվածության փոքր բեկորները (200 bp-ից ցածր) հեռացնելու վրա դեռևս լավ չէ:

Ուլտրամանուշակագույն ալիքի երկարությունը (նմ) ընդհանուր առմամբ 254/300 նմ է, և բավական է 30 րոպե ճառագայթել:Պետք է նշել, որ PCR մնացորդային արտադրանքների աղտոտումը վերացնելու համար ուլտրամանուշակագույն ճառագայթների ընտրության ժամանակ պետք է հաշվի առնել PCR արտադրանքի երկարությունը և հիմքերի բաշխումը արտադրանքի հաջորդականությամբ:Ուլտրամանուշակագույն ճառագայթումը արդյունավետ է միայն 500 bp-ից բարձր երկար բեկորների համար և քիչ ազդեցություն ունի կարճ բեկորների վրա:

Ուլտրամանուշակագույն ճառագայթման ժամանակ ՊՇՌ արտադրանքի պիրիմիդինային հիմքերը կձևավորեն դիմերներ:Այս դիմերները կարող են դադարեցնել ընդլայնումը, բայց ԴՆԹ-ի շղթայի ոչ բոլոր պիրիմիդինները կարող են ձևավորել դիմերներ, և ուլտրամանուշակագույն ճառագայթումը կարող է նաև կոտրել դիմերները:.Դիմերի ձևավորման աստիճանը կախված է ուլտրամանուշակագույն ալիքի երկարությունից, պիրիմիդինային դիմերի տեսակից և դիմերի տեղամասին կից նուկլեոտիդների հաջորդականությունից։Հետևաբար, եթե PCR ուժեղացված բեկորները փոքր են, խորհուրդ է տրվում օգտագործել UNG հակա-PCR արտադրանքի աղտոտման համակարգը:

3: Սովորաբար օգտագործվող ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը մաքրող միջոցներ

Աերոզոլները հեշտությամբ առաջանում են, երբ ավելացվում են պիպետներ, ինչը դժվար է խուսափել, և այն արագ նստելու է:Ուստի, անկասկած, լավ ընտրություն է հաճախակի օգտագործել ԴՆԹ-ի աղտոտվածության հատուկ մաքրող սարքերը՝ կանխելու ԴՆԹ-ի աղտոտվածության տարածումը:

4: Օգտագործեք UNG հակաաղտոտման համակարգ

PCR արտադրանքի աղտոտումը հեռացնելուց հետո փորձարկման լաբորատորիան կարող է օգտագործել UNG հակա-PCR արտադրանքի աղտոտման համակարգը՝ կանխելու PCR արտադրանքի աղտոտումը:Ընդհանուր լաբորատորիաներում դուք կարող եք կատարել պարզ փորձարարական բաժանումներ, խստորեն առանձնացնել PCR արտադրանքի տարածքը այլ տարածքներից, սահմանել որոշակի լաբորատոր կանոններ և կանոնակարգեր և անցկացնել համապատասխան ուսուցում PCR արտադրանքի աղտոտման առաջացումը կանխելու համար:

Առաջարկություններ. PCR-ի ողջամիտ լաբորատորիայի ստեղծումը, PCR-ի լավ միջավայրի պահպանումը, ստանդարտ PCR գործառնական ընթացակարգերի ձևակերպումը և փորձարարների խիստ աշխատանքային իրազեկության զարգացումը PCR փորձերի աղտոտումը կանխելու կամ նվազեցնելու բանալիներն են: