Ստեղծել PCR փորձարարական SOP՝ փորձարարական անձնակազմի վարքագիծը ստանդարտացնելու համար:
Փորձարարը խստորեն հետևում է գործառնական ընթացակարգերին և նվազագույնի է հասցնում PCR աղտոտումը, որը կարող է առաջանալ մարդկային գործոններով կամ կանխել աղտոտման առաջացումը:Բացի այդ, փորձարարը պետք է ունենա համապատասխան մասնագիտական գիտելիքներ և հմտություններ, ներառյալ հարակից սարքավորումների շահագործման հմտությունները, աշխատանքային ողջ գործընթացը պարզաբանելու, աղտոտման բուժման մեթոդներին և լաբորատոր որակի վերահսկման մեթոդներին տիրապետելու և թեստի արդյունքները ճիշտ մեկնաբանելու ունակություն:
Ստեղծել ստանդարտ PCR լաբորատորիա:
ՊՇՌ լաբորատորիան սկզբունքորեն բաժանված է չորս ոլորտների՝ մասնավորապես ռեագենտի պատրաստման տարածք, նմուշի մշակման տարածք, ուժեղացման տարածք և ուժեղացման արտադրանքի վերլուծության տարածք:Առաջին երկու տարածքները նախաամպլիֆիկացիոն տարածքներ են, իսկ վերջին երկու տարածքները՝ հետուժեղացման տարածքներ:Նախաուժեղացման գոտին և հետուժեղացման գոտին պետք է խստորեն տարանջատվեն:Փորձարարական նյութերը, ռեակտիվները, ձայնագրող թուղթը, գրիչները, մաքրող նյութերը և այլն, կարող են հոսել միայն նախաուժեղացման տարածքից մինչև ուժեղացման տարածք, այսինքն՝ ռեագենտի պատրաստման տարածքից → նմուշի մշակման տարածքից → ուժեղացման տարածքից → ուժեղացման արտադրանքի վերլուծության տարածքից և չպետք է հետ հոսեն:Լաբորատորիայում օդի հոսքը նույնպես պետք է հոսի նախաամպլիֆիկացման տարածքից դեպի հետուժեղացման տարածք, այլ ոչ թե հոսի հետընթաց:ՊՇՌ լաբորատորիայի իդեալական դիզայնը ներկայացված է ստորև.
Նկար Ա. ՊՇՌ լաբորատոր տեղադրման իդեալական ռեժիմ՝ բուֆերային սենյակում բացասական ճնշմամբ
Նկար Բ. ՊՇՌ լաբորատորիայի տեղադրման իդեալական ռեժիմ՝ բուֆերային սենյակում դրական ճնշմամբ
Նկար Ա-ում և Բ-ում տրված PCR լաբորատորիայի տեղադրման դիագրամները պետք է լինեն ավելի իդեալական տեղադրման ռեժիմ, և պայմաններով լաբորատորիան կարող է նախագծման համար դիմել այս ռեժիմին:Սովորական լաբորատորիաների համար խորհուրդ է տրվում, որ PCR ուժեղացման տարածքը և արտադրանքի վերլուծության տարածքը կարելի է առանձնացնել, իսկ կափարիչի բացումը պետք է հնարավորինս կրճատվի նմուշի պատրաստման և ՊՇՌ ուժեղացման տարածքում:Հիշեք՝ արտադրանքի վերլուծության տարածքում գտնվող արտադրանքները և փորձնական նյութերը խստիվ արգելվում են տեղափոխել նմուշի պատրաստման տարածք և PCR ուժեղացման տարածք:
Եթե լաբորատորիան կատարում է միայն ՊՇՌ հայտնաբերում և նույնականացում, խորհուրդ է տրվում օգտագործել լյումինեսցենտային քանակական ՊՇՌ սովորական ՊՇՌ-ի փոխարեն:
Ֆլյուորեսցենտային քանակական PCR հայտնաբերման արդյունքները կարող են հավաքվել և վերլուծվել լյումինեսցենտային ազդանշանների միջոցով, ուստի ռեակցիայից հետո էլեկտրոֆորեզի համար կափարիչը բացելու կարիք չկա, ինչը խուսափում է PCR արտադրանքի աղտոտումից, որն առաջանում է ռեակցիայի արտադրանքի արտահոսքից՝ աերոզոլներ ձևավորելու համար:Եթե գելային էլեկտրոֆորեզի բեռնման փուլի ընթացքում ավելացնեք գլխարկների բացվածքների քանակը, հնարավոր է, որ տեղի ունենա աերոզոլային աղտոտում:Խորհուրդ է տրվում նպաստել քանակական ՊՇՌ-ի կիրառմանը և աստիճանաբար փոխարինել որակական ՊՇՌ-ին:
PCR ռեակցիայի համար օգտագործվում է UNG հակա-PCR արտադրանքի աղտոտման համակարգը:
Համակարգն օգտագործում է dUTP՝ dTTP-ի փոխարեն:PCR ռեակցիայից հետո բոլոր PCR արտադրանքները (ԴՆԹ-ի բեկորները) ներառվում են dUTP-ի հետ;PCR ռեակցիայի հաջորդ փուլում համակարգին ավելացված UNG ֆերմենտը ինկուբացվում է 37°C ջերմաստիճանում 5 րոպե առաջ ՊՇՌ-ից առաջ, որը կարող է հատուկ քայքայել dUTP պարունակող ԴՆԹ-ի բոլոր բեկորները, այնուհետև կատարել PCR ռեակցիա:Սա կարող է ամբողջությամբ հեռացնել աերոզոլային աղտոտվածությունը, որն առաջացել է PCR արտադրանքներից:Էֆեկտը ներկայացված է ստորև բերված նկարում.
Նշում. ուղղակի PCR շարքի համար կարող եք ընտրել Foregene-ի հակաPCR արտադրանքի աղտոտման համակարգի սերիական արտադրանքները:Առաջարկել
Լաբորատորիաների համար, որոնք իրականացնում են լայնածավալ գենոտիպային փորձարկումներ, խստորեն խորհուրդ է տրվում օգտագործել UNG հակա-PCR արտադրանքի աղտոտման համակարգը ռեակտիվների փորձարկման համար՝ ի լրումն ողջամիտ լաբորատորիաների կառուցման:
Հիշեցում. այս համակարգի օգտագործումը չի կարող հեռացնել PCR արտադրանքի աղտոտումը, որն արդեն առաջացել է:Հետևաբար, UNG համակարգը պետք է օգտագործվի համապատասխան փորձարկման սկզբում, իսկ UNG համակարգը պետք է օգտագործվի PCR ուժեղացման համար, որպեսզի կանխվի PCR արտադրանքի աղտոտումը Կեղծ դրական:
Խորհուրդ է տրվում օգտագործել Foregene-ի Direct PCR-UNG համակարգը լայնածավալ փորձարկումներ իրականացնելիս, ինչպիսիք են.
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG:
Foregene-ի հավաքածուների այս շարքըկարող է ոչ միայն արագ և լայնածավալ PCR հայտնաբերում կատարել, այլ նաև արդյունավետորեն կանխել և վերահսկել PCR արտադրանքի աղտոտումը:
Հրապարակման ժամանակը՝ Մար-19-2021
