Առաջնորդել

Երկար չկոդավորող ՌՆԹ-ն, lncRNA-ն 200 նուկլեոտիդից ավելի երկարություն ունեցող ոչ կոդավորող ՌՆԹ է, ընդհանուր առմամբ 200-100000 նտ:lncRNA-ն կարգավորում է գեների արտահայտումը էպիգենետիկ, տրանսկրիպցիոն և հետտրանսկրիպցիոն մակարդակներում և մասնակցում է X քրոմոսոմի լռեցմանը, գենոմի տպագրմանը և քրոմատինի ձևափոխմանը, տրանսկրիպցիայի ակտիվացմանը, տրանսկրիպցիոն միջամտությանը, միջուկային տրանսպորտին, բջջային ցիկլի կարգավորումին, բջիջների դիֆերենցիալացմանը և դոզայի փոխհատուցման այլ կարևոր էֆեկտներին: և մարդու հիվանդությունների կանխարգելում և ներկայումս կենսաբժշկության ոլորտում ամենաթեժ կետերից են։

01  LncRNA-ի տեսակներն ու բնութագրերը

lncRNA-ն բաժանվում է բազմաթիվ տեսակների՝ ըստ դրա ձևավորման տարբեր աղբյուրների, ինչպես ցույց է տրված վերևի նկարում:Ունի հետևյալ բնութագրերը.

1. lncRNA-ները սովորաբար ավելի երկար են՝ դիֆերենցման ժամանակ դինամիկ արտահայտությամբ և միացման տարբեր մեթոդներով
2. Համեմատած կոդավորող գեների հետ՝ lncRNA սովորաբար արտահայտման ավելի ցածր մակարդակ ունի
3. lncRNA-ների մեծ մասը ունեն ակնհայտ ժամանակային և տարածական արտահայտման առանձնահատկություններ հյուսվածքների տարբերակման և զարգացման գործընթացում
4. Ուռուցքների և այլ հիվանդությունների դեպքում կան բնորոշ արտահայտություններ
5. LncRNA-ի ենթաբջջային տեղակայումները բազմազան են
6. Հերթականությունը ցածր է պահպանության մեջ, բայց ֆունկցիան ունի որոշակի պահպանման աստիճան և այլն։

02 Հաճախակի տրվող հարցեր LncRNA հակադարձ տառադարձման վերաբերյալ

Բջիջներում lncRNA-ի ցածր պարունակության, երկար երկարության և բարձր մակարդակի կառուցվածքի պատճառով նման ՌՆԹ-ն հաճախ ունի բարդ կառուցվածքներ, ինչպիսիք են ցողունային հանգույցները կամ վարսահարդարիչները, և RT-qPCR-ն հակված է անհաջող հակադարձ տառադարձման կամ ցածր արդյունավետության խնդիրներին:

03 LncRNA հակադարձ տառադարձման լուծում

Կենտրոնական կանոնում ՌՆԹ վիրուսների՝ իրենց սեփական հակադարձ տրանսկրիպտազի միջոցով ԴՆԹ-ն որպես ձևանմուշ սինթեզելու գործընթացը կոչվում է հակադարձ տրանսկրիպցիա։ՌՆԹ վիրուսի հակադարձ տրանսկրիպտազի օգտագործման գործընթացը cDNA կաղապարը in vitro սինթեզելու համար կոչվում է հակադարձ տրանսկրիպցիա:Հակադարձ արտագրման համակարգում ընդգրկված հիմնական տարրերը՝ ՌՆԹ կաղապար, հակադարձ տրանսկրիպտազ, պրայմերներ և այլ բաղադրիչներ։

1.ՌՆԹ կաղապար

ՌՆԹ-ի կաղապարի ազդեցությունը հակադարձ տրանսկրիպցիայի վրա արտացոլվում է նրա կառուցվածքի, մաքրության և ամբողջականության մեջ:Որքան բարձր է արդյունահանվող ՌՆԹ-ի մաքրությունը և ամբողջականությունը, այնքան բարձր է հակադարձ տրանսկրիպցիայի արդյունավետությունը և ավելի ճշգրիտ են հետագա քանակական արդյունքները:Սովորաբար օգտագործվող ՌՆԹ արդյունահանման ռեակտիվներով մաքրված ՌՆԹ-ն հաճախ պարունակում է ալկոհոլի և գուանիդինի աղերի մնացորդներ, որոնք ուժեղ արգելակող ազդեցություն ունեն հակադարձ տրանսկրիպտազի մեծ մասի վրա:

2. Հակադարձ տրանսկրիպտազ

Հակադարձ տրանսկրիպտազը առանցքային ազդեցություն ունի ամբողջ հակադարձ տրանսկրիպցիոն համակարգի վրա:Շատ լաբորատորիաներում օգտագործվող հակադարձ տրանսկրիպտազի համար հարմար ջերմաստիճանը սովորաբար 42°C է:Իրականում, բարձր մակարդակի ՌՆԹ կառուցվածքի բացումը պահանջում է ավելի բարձր ջերմաստիճան, իսկ հակադարձ տրանսկրիպտազի պահանջներն ավելի բարձր են։

3.Այբբենարան

Հակադարձ տրանսկրիպցիոն պրայմերները ներառում են գենային հատուկ պրայմերներ, պատահական պրայմերներ և Oligo dT պրայմերներ:LncRNA-ների մեծ մասը չի պարունակում polyA պոչեր, և կարևոր է պատահական այբբենարանները պատշաճ կերպով համապատասխանեցնել Oligo dT-ին:

4. Այլ բաղադրիչներ

Հաշվի առնելով այն փաստը, որ ՌՆԹ-ն հատկապես հեշտ է քայքայվել, բաղադրիչների ներմուծումը հակադարձ արտագրման համակարգում կարող է նվազագույնի հասցնել, ինչը կարող է արդյունավետորեն կանխել RNase-ի մուտքը և ապահովել հակադարձ տրանսկրիպցիայի սահուն առաջընթացը:

Foregeneստանում է ՌՆԹ կաղապարից, հակադարձ տրանսկրիպցիան դեպի qPCR

Համակողմանիորեն ուղեկցեք ձեր lncRNA հայտնաբերումը

Կենդանիների ընդհանուր ՌՆԹ IսփոփանքՀավաքածու (gDNA հեռացման սյունակով)

Բջջի ընդհանուր ՌՆԹ IսփոփանքՀավաքածու (gDNA հեռացման սյունակով)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase-ով) (սուպեր պրեմիքս առաջին շղթայի cDNA սինթեզի համար lncRNA-ից)

Իրական ժամանակում PCR EasyTM-SYBR Green I

Aառավելություններ ofՌՆԹ արդյունահանում.

Հավաքածուն օգտագործում է երրորդ սերնդի ՌՆԹ արդյունահանման տեխնոլոգիա, կարիք չկա օգտագործել DNase:

11 րոպե 96, 24, 12 և 6 ջրհորների ափսեի մշակված բջիջներից, բարձր արդյունավետությամբ արդյունահանում gDNA-ից զերծ, բարձր մաքրությամբ, բարձրորակ ընդհանուր բջջային ՌՆԹ:

LncRNA հակադարձ տառադարձման առավելությունները.

Հակադարձ արտագրման համակարգ, որը հատուկ մշակվել է LncRNA-ի համար՝ գենոմային ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը արագ հեռացնելու համար:

Հակադարձ արտագրման համակարգն ունի բարձր ջերմային կայունություն և դեռևս ունի լավ հակադարձ տառադարձման կատարում 50°C ջերմաստիճանում:

Բարձր GC պարունակությամբ և բարդ երկրորդական կառուցվածքով ձևանմուշները կարող են շրջվել բարձր արդյունավետությամբ:

Առավելություններըof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase-ն ունի ուժեղացման ավելի բարձր արդյունավետություն, ուժեղացման ավելի բարձր զգայունություն և ուժեղացման ավելի բարձր յուրահատկություն

Օպտիմիզացված Real PCR Easy Mix-ը դարձնում է SYBR Green I-ի հայտնաբերման ավելի բարձր զգայունություն, և դրա ֆլյուորեսցենտային ինտենսիվությունը 3-5 անգամ գերազանցում է նմանատիպ արտադրանքներին, ինչը կարող է բավարարել տարբեր տեսակի ֆլուորեսցենտային քանակական փորձերի կարիքները: