Ինչքան գիտես

Ն.-ի մասինուկլեինաթթվի արդյունահանում

Մաքրված նուկլեինաթթվի սկիզբը և վերջը

Սկզբում ամեն ինչ դժվար է, մաքրված նուկլեինաթթուն ամենաշատն է

Մոլեկուլային փորձերի նախաձեռնում, հետագա փորձերի համար

Հաջողությունը կամ ձախողումը վճռորոշ ազդեցություն ունի:

Ուլտրամանուշակագույն ուլտրամանուշակագույն սպեկտրոֆոտոմետրը նախընտրում են շատ գիտնականներ, քանի որ այն կարող է պարզ, արագ և տնտեսապես հայտնաբերել նուկլեինաթթվի կոնցենտրացիան և սպիտակուցի և աղի իոնների մնացորդները:

Ինչպես բոլորս գիտենք, A260 նշանակում է նուկլեինաթթվի կլանման OD արժեք, A280 նշանակում է սպիտակուցի կոնցենտրացիայի կլանման OD արժեք, A230 նշանակում է աղի իոնների կոնցենտրացիայի կլանման OD արժեք, ուստի A260-ը կարող է փոխակերպել նուկլեինաթթվի կոնցենտրացիան, A260/280 նշանակում է սպիտակուցի մնացորդ, A260/230 նշանակում է աղի իոնների մնացորդը բացահայտված է այս թվի հիման վրա:պայմանականհավատալ, որ դա կարող է բացատրել ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի մաքրությունըորոշակի չափով.Այն նուկլեինաթթվի ելքի և մաքրության նույնականացման միակ ստանդարտը չէ, այն օգտագործվում է միայն որպես հղում և «ոսկու ստանդարտ» չէ:

Thermo Fisher ND-2000 ձեռնարկը շեշտում է թեստի արդյունքների հուսալիությունը

Պատճառն այն է, որ միկրո/ուլտրամիկրո ուլտրամանուշակագույն սպեկտրոֆոտոմետրի օգտագործմամբ ստացված արդյունքները արտացոլում են միայն կողքից նուկլեինաթթվի ելքը և մաքրությունը, և կան բազմաթիվ ազդող գործոններ (օպտիկական ուղի, նմուշի ծավալ, նմուշի կոնցենտրացիան, pH արժեքը, այլ իոններ, որոնք ազդում են ներծծման չափման վրա և այլն):Միևնույն ժամանակ, կլանման արժեքի որոշման նյութի յուրահատկության բացակայության պատճառով, միաշղթա ԴՆԹ, երկշղթա ԴՆԹ, ՌՆԹ, dNTP-ներ և որոշ սպիտակուցներ բոլորն ունեն կլանման գագաթնակետեր 260 նմ ալիքի երկարությամբ, և միայն A260-ով որոշված ​​կոնցենտրացիան պարտադիր չէ, որ իրական ԴՆԹ կամ ՌՆԹ լինի:Համակենտրոնացումը, դրա ամբողջականությունն ու դեգրադացումը հնարավոր չէ դատել:

Այսպիսով, ինչպե՞ս դատել մեր մաքրված նուկլեինաթթվի որակը:Բացի միկրո/ուլտրամիկրո ուլտրամանուշակագույն ուլտրամանուշակագույն սպեկտրոֆոտոմետրի հայտնաբերման համար, այնպիսի մեթոդներ, ինչպիսիք են ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզը, նույնպես պահանջվում են նուկլեինաթթվի մաքրությունն ու ամբողջականությունը տեսողականորեն ցուցադրելու և կոնցենտրացիան որոշակի չափով ցույց տալու համար:Այս կերպ արժանահավատ են տարբեր մեթոդների հայտնաբերման արդյունքներից ստացված նուկլեինաթթվի ելքը և մաքրությունը։

Փորձարարական գծապատկերների համեմատություն

H1299 բջիջների գենոմային ԴՆԹ-ն արդյունահանվել է A ընկերության ԴՆԹ-ի արդյունահանման փաթեթների միջոցով, և նկատվել է զգալի կեղտոտվածություն, ինչը հանգեցրել է OD-ի բարձր արժեքներին:

(OD-ի չափման արժեքը և համապատասխան էլեկտրաֆերոգրամա)

Գնահատման ինդեքս

Կա՞ «ոսկե ստանդարտ» նուկլեինաթթվի ստացման և որակի փորձարկման համար:

Որքան գիտենք, չկա պարզ, արագ և էժան մեթոդ։Անկախ նրանից, թե դա սպեկտրոֆոտոմետր է, գելային էլեկտրոֆորեզ կամ զանգվածային սպեկտրոմետրիա, դրանք բոլորն արտացոլում են լուծույթում նուկլեինաթթվի կոնցենտրացիան և մաքրությունը տարբեր կողմերից, և դրանք պետք է դատել՝ հղում կատարելով միմյանց:

Լավագույն գնահատման ցուցանիշը միշտ էհետագա փորձարարական կիրառումը.Այն չի ազդում հակադարձ տրանսկրիպցիայի և ՊՇՌ ուժեղացման արդյունավետության վրա:Հուսալի ուժեղացման արտադրանքների և Ct արժեքների ձեռքբերումը և հաջորդականության միջոցով ամբողջական հաջորդականություն ստանալը նուկլեինաթթվի հաջող արդյունահանում է:

Ամփոփելով, միայն հարաբերակցության տեսության տեսակետը պետք է վիճարկվի «լավ ներքևում գտնվող փորձարարական արդյունքների օգտագործման որպես լավ արդյունահանման պարամետրերի» տեսակետով:

Առաջարկվող Foregene ԴՆԹ ՌՆԹ-ի արդյունահանման փաթեթներ՝ ԴՆԹ/ՌՆԹ բարձր մաքրություն ստանալու համար.

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/