ՊՇՌ, բազմակի ՊՇՌ, In situ PCR, Հակադարձ PCR, RT-PCR, qPCR (1)–ՊՇՌ

Մենք կդասավորենք տարբեր PCR-ի հասկացությունները, քայլերն ու մանրամասները

Ⅰ. ՊՇՌ

Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիան, որը կոչվում է PCR, մոլեկուլային կենսաբանական տեխնոլոգիա է, որն օգտագործվում է ԴՆԹ-ի հատուկ բեկորները մեծացնելու համար:Այն կարելի է համարել որպես հատուկ ԴՆԹ-ի վերարտադրություն in vitro:ԴՆԹ պոլիմերազը (DNA Polymerase I) հայտնաբերվել է դեռևս 1955 թվականին, իսկ Klenow Fragment of E. Coli-ն, որն ունի փորձարարական արժեք և գործնականություն, հայտնաբերվել է դոկտոր Հ. Կլենոուի կողմից 1970-ականների սկզբին, բայց քանի որ այս ֆերմենտը չի հանդուրժում ջերմաստիճանը, բարձր ջերմաստիճանը կարող է այլասերել այն, ուստի այն չի ենթարկում պոլիմերային շղթայական դեգեներացիայի ռեակցիային:Այսօր կիրառվող ֆերմենտները (կոչվում են Taq polymerase), մեկուսացվել են Thermus aquaticus-ից՝ տաք աղբյուրների բակտերիայից 1976 թվականին: Դրա առանձնահատկությունն այն է, որ այն կարող է դիմակայել բարձր ջերմաստիճանին և իդեալական ֆերմենտ է, սակայն այն լայնորեն կիրառվում է 1980-ականներից հետո:PCR-ի սկզբնական պարզունակ նախատիպի սկզբնական հայեցակարգը նման է գեների վերանորոգմանը և պատճենմանը, որն առաջարկվել է դոկտոր Քյել Քլեպի կողմից 1971 թվականին: Նա հրապարակել է առաջին պարզ և կարճաժամկետ գենային պատճենը (նման է PCR-ի առաջին երկու ցիկլային ռեակցիաներին):Այսօր մշակված ՊՇՌ-ն մշակվել է դոկտոր Քերի Բ. Մալիսի կողմից 1983 թվականին: Դոկտոր Մալիսը այդ տարի սպասարկում էր PE ընկերություններին, ուստի PE-ն հատուկ կարգավիճակ ունի PCR արդյունաբերության մեջ:Դոկտոր Մալիսը պաշտոնապես հրապարակեց առաջին առնչվող աշխատությունը Սաիկիի և մյուսների հետ 1985 թվականին: Այդ ժամանակից ի վեր, PCR-ի օգտագործումը օրական հազարավոր մղոններ է, և հարակից փաստաթղթերի որակը, կարելի է ասել, որ շատ այլ հետազոտական ​​մեթոդներ անճաշակ են դարձնում:Հետագայում PCR տեխնոլոգիան լայնորեն կիրառվում է կենսաբանական գիտական ​​հետազոտություններում և կլինիկական կիրառություններում՝ դառնալով մոլեկուլային կենսաբանության հետազոտության ամենակարևոր տեխնոլոգիան:Մալիսը նաև 1993 թվականին ստացել է քիմիայի Նոբելյան մրցանակ։

ՊՇՌՍկզբունք

PCR տեխնոլոգիայի հիմնական սկզբունքը նման է ԴՆԹ-ի բնական վերարտադրության գործընթացին, և դրա առանձնահատկությունը կախված է օլիգոնուկլեոտիդային պրայմերից, որը լրացնում է թիրախային հաջորդականության երկու ծայրերը:PCR-ը բաղկացած է դեգեներացիա-կռում-ընդլայնման երեք հիմնական ռեակցիաների քայլերից. ① Կաղապարի ԴՆԹ-ի այլասերում. ԴՆԹ-ի կաղապարը որոշակի ժամանակ տաքացնելուց մինչև մոտ 93°C, երկշղթայական ԴՆԹ-ի կրկնակի ԴՆԹ լուծույթը, որը ձևավորվել է PCR-ի ամպլիֆիկացմամբ, ձևանմուշի ԴՆԹ-ի ամպլիֆիկացմամբ, դարձնել այն մեկ շղթայի համար, որպեսզի այն պատրաստվի մեկ շղթայի հետ:② Կաղապարի ԴՆԹ-ի և այբբենարանի եռացումը (միացությունը). Կաղապարի ԴՆԹ-ն տաքացնելուց և մեկ շղթայի վերածվելուց հետո ջերմաստիճանը իջնում ​​է մինչև մոտ 55°C:Պրայմերի և կաղապարի ԴՆԹ-ի միաշղթայի կոմպլեմենտար հաջորդականությունը:③ Այբբենարանի երկարացումը. ԴՆԹ-ի ձևանմուշը. այբբենարանի կապը հիմնված է TaqDNA պոլիմերազի գործողության վրա՝ որպես ռեակցիայի հումք dNTP:Պահպանեք կրկնօրինակման սկզբունքը, սինթեզեք նոր կիսապահպանված պատճենների շղթա, որը լրացնում է կաղապարի ԴՆԹ-ի շղթան, և կրկնվող ցիկլի դեգեներացիա-կռում-ընդլայնում երեք գործընթացները կարող են ստանալ ավելի շատ «կիսամերձ պատճենների շղթա», և այս նոր շղթան կրկին հասանելի է: Դարձեք ձևանմուշ հաջորդ փուլի համար:Օղակը ավարտելու համար պահանջվում է 2-4 րոպե, թիրախ գենը կարող է 2-3 ժամվա ընթացքում մի քանի միլիոն անգամ ուժեղացվել:

ՍտանդարտՊՇՌՌեակցիայի համակարգ

PCR ռեակցիայի հինգ տարրեր

Գոյություն ունեն հիմնականում հինգ տեսակի նյութեր, որոնք ներգրավված են PCR ռեակցիայի մեջ, այն է՝ պրայմեր, ֆերմենտ, dNTP, կաղապար և բուֆեր (պահանջվում է Mg2+):[PCR ընթացակարգ]

Ստանդարտ PCR գործընթացը բաժանված է երեք փուլի

1. ԴՆԹ-ի դեգեներացիա (90°C-96°C). ԴՆԹ-ի երկշղթա կաղապարներ ջերմային ազդեցության տակ, ջրածնային կապերը կոտրվում են՝ ձևավորելով մեկ շղթայով ԴՆԹ:

2. Եռացում (25℃ -65℃). Համակարգի ջերմաստիճանը նվազում է, այբբենարանը միացվում է ԴՆԹ-ի կաղապարի հետ՝ ձևավորելով տեղական երկշղթա:

3. Ընդլայնում (70℃ -75℃). Taq ֆերմենտի ազդեցության տակ (մոտ 72°C, լավագույն ակտիվությունը) dNTP-ն օգտագործվում է որպես հումք, տարածվում է այբբենարանի 5′ ծայրից → 3′ ծայրից, սինթեզը և ձևանմուշը լրացնում են միմյանց ԴՆԹ-ի շղթան:

Յուրաքանչյուր ցիկլ դենատուրացված է, կռվում և երկարացվում է՝ կրկնապատկելով ԴՆԹ-ի պարունակությունը:Ներկայումս, ամպլիֆիկացման կարճ տարածքի պատճառով, որոշ PCR կարող է կրկնօրինակվել շատ կարճ ժամանակում, նույնիսկ եթե Taq ֆերմենտի ակտիվությունը օպտիմալ չէ, ուստի այն կարող է փոխվել երկու քայլի, այսինքն՝ եռացումը և երկարացումը կարող են կատարվել միաժամանակ 60°C-65°C ջերմաստիճանում:Բարձրացման և սառեցման գործընթացը նվազեցնելու և արձագանքման արագությունը բարելավելու համար:

PCR ռեակցիայի առանձնահատկությունները

● Բարձր կոնկրետություն

PCR-ի արձագանքի հատուկ որոշիչ գործոններն են.②Հիմքի զուգավորման սկզբունքը:③ TaqDNA պոլիմերազի սինթեզի ռեակցիայի հավատարմությունը:④ Թիրախային գենի առանձնահատկությունն ու պահպանողականությունը:

Բանալին է այբբենարանների և կաղապարների ճիշտ համադրությունը:Այբբենարանի և կաղապարի կապումը և այբբենարանի շղթայի երկարացումը հիմնված են ալկալային հիմքերի համապատասխանության սկզբունքի վրա:Պոլիմերազի սինթեզի ռեակցիաների հավատարմությունը և Taq ԴՆԹ պոլիմերազի բարձր ջերմաստիճանի դիմադրությունը ռեակցիայի մեջ ձևանմուշի և այբբենարանի կապը (միացությունը) կարող է իրականացվել ավելի բարձր ջերմաստիճանում:Համակցման առանձնահատկությունը մեծապես ավելացել է:Հոլովակը կարող է պահպանել կոռեկտության բարձր աստիճան։Ընտրելով թիրախային գենետիկական շրջան՝ բարձր պահպանողականությամբ և բարձր պահպանողականությամբ, դրա առանձնահատկությունն ավելի բարձր է։

● Բարձր զգայունություն

PCR արտադրանքի արտադրության ծավալը մեծանում է ինդեքսով, ինչը կարող է ընդլայնել Picker-ի մեկնարկային ձևանմուշը (PG=10-12) միկրոկոնտրոլերի մակարդակը մինչև միկրոգրամների մակարդակը բարձրացնելու համար (μg= -6):Թիրախային բջիջները կարող են հայտնաբերվել 1 միլիոն բջիջներից.վիրուսների հայտնաբերման ժամանակ PCR-ի զգայունությունը կարող է հասնել 3 RFU-ի (դատարկ բծերի ձևավորված միավորներ);Բակտերիաների գիտության մեջ հայտնաբերման նվազագույն մակարդակը 3 բակտերիա է:

● Պարզ և արագ

PCR արտացոլումը օգտագործում է բարձր ջերմաստիճանի Taq ԴՆԹ պոլիմերազ, որը միաժամանակ ավելացնում է ռեակցիայի լուծույթը, այսինքն՝ դեգեներացիա-ծակել-ընդլայնման ռեակցիա ԴՆԹ-ի ուժեղացման լուծույթի և ջրային բաղնիքի կաթսայի վրա:Ընդհանուր առմամբ, ուժեղացման ռեակցիան ավարտվում է 2-ից 4 ժամվա ընթացքում:Ընդլայնված արտադրանքը, ընդհանուր առմամբ, վերլուծվում է էլեկտրական թրով, և պարտադիր չէ, որ օգտագործեն իզոտոպներ, ռադիոակտիվ աղտոտվածություն և հեշտ առաջխաղացում:

● Նմուշի մաքրությունը ցածր է

Վիրուսները կամ բակտերիաները և կուլտուրայի բջիջները առանձնացնելու կարիք չկա:ԴՆԹ-ի անմշակ արտադրանքները և ՌՆԹ-ն կարող են օգտագործվել որպես ուժեղացուցիչներ:ԴՆԹ-ի ուժեղացման հայտնաբերումը կարող է օգտագործվել ուղղակիորեն՝ օգտագործելով կլինիկական նմուշներ, ինչպիսիք են արյունը, մարմնի հեղուկը, հազը լվանալու հեղուկը, մազերը, բջիջները և կենդանի հյուսվածքները:

ՊՇՌընդհանուր խնդիրներ

● Կեղծ բացասական, առանց ուժեղացված շերտերի

ՊՇՌ ռեակցիայի հիմնական փուլերը ներառում են.Պատճառը գտնելը նույնպես պետք է վերլուծվի և ուսումնասիրվի վերը նշված հղումների համար։

Կաղապարներ.⑤ Ականազերծող նուկլեինաթթվի այլասերումը մանրակրկիտ չէ:Երբ ֆերմենտների և պրայմերների որակը լավ է, չկա ուժեղացման գոտի, որը, ամենայն հավանականությամբ, նմուշների մարսողական բուժումն է:Կաղապարի նուկլեինաթթվի արդյունահանման գործընթացում ինչ-որ բան այն չէ, ուստի արդյունավետ և կայուն մարսողության լուծույթ պատրաստելու համար դրա ընթացակարգը պետք է ֆիքսվի և ոչ թե կամայականորեն փոխվի:

Ֆերմենտի ապաակտիվացում. նոր ֆերմենտը կամ հին և նոր ֆերմենտները պետք է օգտագործվեն միասին՝ վերլուծելու, թե արդյոք ֆերմենտի ակտիվությունը կորչում է, թե ոչ, ինչը հանգեցնում է կեղծ բացասականների:Պետք է նշել, որ Taq ֆերմենտը կամ էթիդիում բրոմիդը երբեմն մոռացվում է։

Այբբենարան. այբբենարանի որակը, այբբենարանի կոնցենտրացիան և արդյոք երկու այբբենարանների կոնցենտրացիան սիմետրիկ է:Դա PCR-ի ձախողման ընդհանուր պատճառ է կամ աճող գոտին իդեալական չէ և հակված է ցրվելու:Որոշ խմբաքանակի համարների այբբենարանների որակի հետ կապված խնդիրներ կան։Երկու այբբենարանները ունեն բարձր կոնցենտրացիա և ցածր կոնցենտրացիան, ինչը հանգեցնում է ցածր արդյունավետության ասիմետրիկ ուժեղացման:Հակազդող միջոցներն են՝ ① Ընտրեք լավ այբբենարան՝ միավորները սինթեզելու համար:② Այբբենարանի կոնցենտրացիան ոչ միայն կախված է OD արժեքից, այլև ուշադրություն է դարձնում այբբենարանի սկզբնական հեղուկին՝ ագար շաքարի գելային էլեկտրոֆորեզ պատրաստելու համար:Պետք է լինի այբբենարանի շերտի գոտի, և երկու այբբենարանների պայծառությունը պետք է ընդհանուր առմամբ համահունչ լինի:Գոտի, PCR-ն այս պահին կարող է ձախողվել, և այն պետք է լուծվի պրայմերների սինթեզի միավորի միջոցով:Եթե ​​այբբենարանը բարձր է, պայծառությունը ցածր է, և դրա կոնցենտրացիան պետք է հավասարակշռված լինի, երբ նոսրացվում է:③ Այբբենարանը պետք է վճարվի և պահվի բարձր կոնցենտրացիայում՝ կանխելու համար սառնարանի բազմաթիվ սառեցումը կամ երկարատև սառնարանային մասերը, որոնք կհանգեցնեն այբբենարանի քայքայմանը և քայքայմանը:④ Այբբենարանի ձևավորումն անհիմն է, օրինակ՝ այբբենարանի երկարությունը անբավարար է, և այբբենարանների միջև ձևավորվում է դիկլաստեր:

Mg2 + կոնցենտրացիան. Mg2 + իոնի կոնցենտրացիան մեծ ազդեցություն ունի PCR ուժեղացման արդյունավետության վրա:Չափազանց կոնցենտրացիան կարող է նվազեցնել PCR ուժեղացման հակառակ սեռը:Եթե ​​կոնցենտրացիան չափազանց ցածր է, PCR ուժեղացման ելքը նույնիսկ կհանգեցնի PCR ուժեղացման ձախողման առանց ընդարձակման գոտու:

Ռեակցիայի ծավալի փոփոխություն. PCR ամպլիֆիկացիայի ժամանակ օգտագործվող ծավալը կազմում է 20ուլ, 30ուլ, և 50ուլ կամ 100ուլլ, PCR ամպլիֆիկացիայի համար դիմումի մեծ ծավալը սահմանվում է ըստ գիտական ​​հետազոտությունների և կլինիկական փորձարկման տարբեր նպատակների:Փոքր ծավալներ պատրաստելուց հետո, ինչպիսին է 20ուլ, անհրաժեշտ է լարը պայմանավորել չափը պատրաստելիս, հակառակ դեպքում այն ​​կձախողվի։

Ֆիզիկական պատճառներ. Տրանսֆորմացիան շատ կարևոր է PCR-ի ուժեղացման համար:Եթե ​​դեգեներացիայի ջերմաստիճանը ցածր է, ապա դեգեներացիայի ժամանակը կարճ է, հավանական է, որ այն տեղի ունենա կեղծ բացասականներով.եռացման չափազանց ցածր ջերմաստիճանը կարող է առաջացնել ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում և նվազեցնել հատուկ ուժեղացման արդյունավետությունը:Մեծ ազդեցություն ունի պրայմերների և ձևանմուշների համադրության վրա՝ նվազեցնելու PCR ուժեղացման արդյունավետությունը:Երբեմն անհրաժեշտ է լինում օգտագործել ստանդարտ ջերմաչափեր՝ ընդլայնման կամ ջրում լուծվող կաթսայի փոփոխականությունը, եռացումը և երկարացված ջերմաստիճանը հայտնաբերելու համար, ինչը PCR-ի ձախողման պատճառներից մեկն է:

Թիրախային հաջորդականության տարբերակներ. Եթե թիրախային հաջորդականությունը տեղի է ունենում, մուտացիա կամ ջնջում, նախատիպի և ձևանմուշի համադրությունը համակցվում է, կամ թիրախային հաջորդականության բացակայության պատճառով այբբենարանը և կաղապարը կկորցնեն լրացուցիչ հաջորդականությունը, և դրա PCR ուժեղացումը հաջող չի լինի:

● Կեղծ դրական

PCR ուժեղացման գոտին կարծես համահունչ է թիրախային հաջորդականության գոտուն, և երբեմն դրա գոտին ավելի կոկիկ և ավելի բարձր է:

Այբբենարանի ձևավորումը տեղին չէ. ուժեղացման ընտրված հաջորդականությունը և ոչ նպատակային ուժեղացման հաջորդականությունը հոմոլոգ են, հետևաբար, երբ PCR ուժեղացումը, ուժեղացված PCR արտադրանքները ոչ նպատակային հաջորդականություններ են:Թիրախային հաջորդականությունը չափազանց կարճ է կամ այբբենարանը չափազանց կարճ է, և այն հակված է կեղծ դրականին:Պետք է վերանախագծել.

Թիրախային հաջորդականության կամ ուժեղացման արտադրանքի խաչաձև աղտոտում. Այս աղտոտման երկու պատճառ կա.Այս տեսակի կեղծ դրականը կարող է լուծվել հետևյալ մեթոդներով. Գործողության ընթացքում եղեք զգույշ և նրբանկատ, որպեսզի կանխեք թիրախային հաջորդականությունը նմուշառման ատրճանակի մեջ կամ դուրս շաղ տալ կենտրոնախույս խողովակից:Բացառությամբ ֆերմենտների և նյութերի, որոնք չեն կարող դիմակայել բարձր ջերմաստիճանին, բոլոր ռեակտիվները կամ սարքավորումները պետք է ախտահանվեն բարձր ճնշմամբ:Կենտրոնախույս խողովակները և նմուշները պետք է օգտագործվեն միաժամանակ:Անհրաժեշտության դեպքում, նախքան նմուշներ ավելացնելը, ռեակցիայի խողովակը և ռեագենտը ենթարկվում են ուլտրամանուշակագույն ճառագայթների՝ գոյություն ունեցող նուկլեինաթթուն ոչնչացնելու համար:Երկրորդը, օդի աղտոտվածության փոքր բեկորները:Այս փոքր բեկորներն ավելի կարճ են, քան թիրախային հաջորդականությունը, սակայն ունեն որոշակի հոմոոլոգիա։Այն կարելի է զուգակցել միմյանց հետ։Պրայմերները լրացնելուց հետո PCR արտադրանքը կարող է ընդլայնվել, ինչը կեղծ դրական արտադրություն կառաջացնի:Այն կարող է օգտագործվել բույն PCR մեթոդը նվազեցնելու կամ վերացնելու համար:

● Հայտնվել ոչ հատուկ ուժեղացման գոտի

ՊՇՌ ուժեղացումից հետո հայտնված շերտերը անհամապատասխան են ակնկալվող չափերին, կամ մեծ են կամ փոքր, կամ միևնույն ժամանակ, կամ միևնույն ժամանակ, սպեցիֆիկ ուժեղացման գոտիները և ոչ հատուկ ուժեղացման գոտիները:Ոչ սպեցիֆիկ շերտերի առաջացումը հետևյալն է. Նախ՝ այբբենարանները թերի են լրացնում թիրախային հաջորդականությանը, կամ այբբենարանի պոլիմերացումը՝ դիկլաստերի ձևավորման համար:Երկրորդն այն է, որ MG2+իոնների կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է, եռացման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է, և PCR ցիկլերի քանակը կապված է:Երկրորդ՝ ֆերմենտների որակն ու քանակը։Հաճախ որոշ աղբյուրների ֆերմենտները հակված են ոչ հատուկ գոտիների, իսկ մյուս աղբյուրի ֆերմենտները չեն առաջանում:Երբեմն տեղի է ունենում նաև ֆերմենտների ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում։Հակադարձ միջոցներն են՝ անհրաժեշտության դեպքում վերանախագծել գրավիչները:Նվազեցրեք ֆերմենտի քանակը կամ փոխարինեք մեկ այլ աղբյուրի ֆերմենտի:Կրճատեք առաջնայինի քանակը, համապատասխան կերպով ավելացրեք կաղապարների քանակը և կրճատեք ցիկլերի քանակը:Պատշաճ կերպով բարձրացրեք հալման ջերմաստիճանը կամ օգտագործեք երկու ջերմաստիճանային կետի մեթոդը (93°C դեգեներացիա, հալում և երկարացում մոտ 65°C-ում):

● Հայտնվել շերտավոր քարշակ կամ քսել ժապավենը

PCR ուժեղացումը երբեմն թվում է, թե կիրառվում է կամ կեղևավորված կամ գորգի նման գոտի:Այդ պատճառով, ֆերմենտների ավելցուկային քանակի կամ ֆերմենտի վատ որակի պատճառով dNTP-ի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է, Mg2+ կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է, եռացման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է, և ցիկլերի քանակը չափազանց շատ է:Հակազդող միջոցներն են՝ ① Նվազեցնել ֆերմենտների քանակը կամ փոխել մեկ այլ աղբյուրի ֆերմենտը:②Նվազեցնել dNTP-ի կոնցենտրացիան ③Պատշապես նվազեցնել Mg2+ կոնցենտրացիան:④ Բարձրացրեք կաղապարների քանակը և կրճատեք ցիկլերի քանակը:

Առնչվող ապրանքներ

PCR Heroᵀᴹ (ներկանյութով)

◮ Ավելի բարձր հավատարմություն՝ սովորական Taq ֆերմենտի 6 անգամ;

◮ Ավելի արագ ուժեղացման արագություն

◮ Կաղապարի ավելի հարմարվողականություն

◮ Ավելի բարձր ուժեղացման արդյունավետություն

◮ Շրջակա միջավայրի նկատմամբ հանդուրժողականությունն ավելի ուժեղ է՝ տեղադրվում է 37°C ջերմաստիճանում մեկ շաբաթվա ընթացքում՝ պահպանելով ավելի քան 90% ակտիվություն;

◮ Այն ունի 5'→3' ԴՆԹ պոլիմերազային ակտիվություն և 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, առանց 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվության:

PCR Easyᵀᴹ (Ներկանյութով)

Եզակի ռեակցիայի համակարգը և բարձր արդյունավետության Taq DNA պոլիմերազը ստիպում են PCR ռեակցիան ունենալ ուժեղացման ավելի բարձր արդյունավետություն, առանձնահատկություն և զգայունություն:

RT-qPCR Easyᵀᴹ (Մեկ քայլ)-SYBR Green I

◮ Մեկ քայլով հանդերձանքը կատարում է հակադարձ տառադարձում և qPCR երկու ռեակցիա նույն խողովակում, միայն անհրաժեշտ է ավելացնել կաղապարի ՌՆԹ, հատուկ PCR պրայմերներ և RNase-Free ddH:₂O.

◮ Կոմպլեկտը կարող է արագ և արդյունավետ կերպով քանակապես վերլուծել վիրուսային ՌՆԹ-ն կամ հետք ՌՆԹ-ն:

◮ Հավաքածուն օգտագործում է եզակի Foregene հակադարձ տրանսկրիպցիոն ռեագենտ և Foregene HotStar Taq ԴՆԹ պոլիմերազ՝ զուգակցված յուրահատուկ ռեակցիայի համակարգի հետ՝ արդյունավետորեն բարելավելու ռեակցիայի ուժեղացման արդյունավետությունն ու առանձնահատկությունը:

◮ Օպտիմիզացված ռեակցիայի համակարգը ստիպում է ռեակցիան ունենալ ավելի բարձր հայտնաբերման զգայունություն, ավելի ուժեղ ջերմային կայունություն և ավելի լավ հանդուրժողականություն:

◮ RT-qPCR Հեշտ^TM(Մեկ քայլ)-SYBR Green I փաթեթը գալիս է ROX ներքին հղման ներկով, որը կարող է օգտագործվել ազդանշանի ֆոնի և ազդանշանային սխալները վերացնելու համար, ինչը հաճախորդների համար հարմար է օգտագործելու քանակական PCR գործիքների տարբեր մոդելներում:

RT Հեշտ^TMII (Master Premix-ի համար առաջին շղթայի cDNA սինթեզ համարԻրական ժամանակի PCR)

-ԳԴՆԹ-ի հեռացման արդյունավետ ունակություն, որը կարող է հեռացնել gDNA-ն կաղապարում 2 րոպեի ընթացքում:

- Արդյունավետ հակադարձ արտագրման համակարգ, առաջին շղթայի cDNA-ի սինթեզն ավարտելու համար պահանջվում է ընդամենը 15 րոպե:

-Բարդ ձևանմուշներ. GC-ի բարձր պարունակությամբ և բարդ երկրորդական կառուցվածքով կաղապարները կարող են նաև հետափոխվել բարձր արդյունավետությամբ:

-Բարձր զգայունության հակադարձ արտագրման համակարգ, pg մակարդակի կաղապարները կարող են նաև ստանալ բարձրորակ cDNA:

-Հակադարձ արտագրման համակարգն ունի բարձր ջերմային կայունություն, ռեակցիայի օպտիմալ ջերմաստիճանը 42℃ է, և այն դեռևս ունի լավ հակադարձ տառադարձման կատարում 50℃-ում: