Լաբորատոր փորձարկումը սկսվում է նմուշների հավաքագրմամբ, իսկ նմուշների հավաքումը ամենահեշտն է անտեսել:Նմուշների հավաքագրման համար ամենակարևորը նմուշի ճիշտ տեսակն ընտրելն է, նմուշառման համապատասխան գործիքների օգտագործումը և ողջամիտ տեղափոխումն ու մշակումը:

I. Նմուշի տեսակը

Ընդհանուր նմուշի տեսակները հետևյալն են.

Նմուշառման մեթոդը կարող է վերաբերել գյուղատնտեսական առևտրի (բազար) շուկայում նոր կորոնավիրուսի բնապահպանական մոնիտորինգի տեխնիկական բնութագրերին».

1. Շվաբրի նմուշներ կոկորդից, ձեռքերից, հագուստից և պրակտիկանտների այլ առարկաներից. անհրաժեշտ է օգտագործել վիրուսի պահպանման լուծույթը վիրուսի նմուշառման խողովակում և ամբողջությամբ ներթափանցել նմուշառման բամբակյա շվաբրերը:Գետնի մակերեսը) բազմիցս կիրառվում և ողողվում է ավելի քան 3 անգամ:Միաժամանակ անհրաժեշտ է կատարել բազմակետ բաշխված նմուշառում նմուշառվող օբյեկտի մակերեսին:

2. Սննդի մակերևույթի շվաբրի նմուշներ. Սննդի նմուշները չեն կարող ուղղակիորեն հավաքվել:Հավաքվող սնունդը պետք է զգուշորեն առանձնացնել և պահել մաքուր նմուշառման տոպրակի մեջ՝ նախքան շվաբրի նմուշները հավաքելը:Պահանջվում է վիրուսի պահպանման լուծույթ օգտագործել վիրուսի նմուշառման խողովակում, նմուշառման բամբակյա շվաբրը ամբողջությամբ թրջելուց հետո, հավաքվող սննդամթերքի նմուշի մակերեսը բազմիցս քսել և ողողել ավելի քան 3 անգամ:Միաժամանակ անհրաժեշտ է կատարել բազմակետ բաշխված նմուշառում նմուշի մակերեսի վրա:

3. Կեղտաջրերի նմուշներ. Ըստ շուկայում դրենաժային համակարգի բաշխվածության, ընտրեք կոյուղաջրերի նմուշառման 2-3 վայրեր՝ կենտրոնանալով խողովակաշարի ներքին ցանցի հավաքման, ջրի հոսքի ուղղությամբ ներքևի կամ քաղաքային խողովակների ցանցի հետ կապի վրա:Շվաբրի նմուշ հավաքելու համար այն ընկղմեք կեղտաջրերի մեջ նմուշառման բամբակյա շվաբրով, որպեսզի այն կլանի կեղտաջրերը և ողողեք այն նմուշառման խողովակի մեջ ավելի քան 3 անգամ:Կեղտաջրերի նմուշներ հավաքելու համար օգտագործեք պոլիէթիլենային պլաստիկ շշեր՝ 30-500 մլ կոյուղաջրերի նմուշներ հավաքելու համար;500 մլ-ից ավելի ծավալով կոյուղաջրերի հավաքման համար կարող են օգտագործվել պոլիէթիլենային պլաստիկե դույլեր կամ տեղում ջրի նմուշառման հատուկ հարստացնող սարքավորում:Միևնույն ժամանակ անհրաժեշտ է կոյուղաջրերի նմուշառման վայրի համար կատարել բաշխված բազմակետ նմուշառում:

4. Կենդանիների նմուշներ. կենդանի կենդանիների համար նմուշառման շվաբրերը կարող են օգտագործվել մարմնի մակերևույթի շվաբրեր հավաքելու համար, օրոֆարինգիալ շվաբրեր և հետանցքային շվաբրեր, ինչպես նաև արտաթորանքի կամ սեկրեցիայի նմուշները կարող են հավաքվել և համապատասխանաբար գրանցվել գրանցման թերթիկում:Կենդանիների նմուշների համար, որոնք ենթարկվել են մորթի և այլն, օգտագործեք բամբակյա շվաբրեր՝ հավաքելու նրանց մարմնի մակերեսի և մարմնի խոռոչի շվաբրի նմուշները:Պահանջվում է վիրուսի պահպանման լուծույթ օգտագործել վիրուսի նմուշառման խողովակում՝ նմուշառման բամբակյա շվաբրը ամբողջությամբ ներթափանցելու համար, այնուհետև կրկնել հավաքվող սննդամթերքի նմուշի մակերեսը:Շաբուն ավելի քան 3 անգամ:Միաժամանակ անհրաժեշտ է կատարել բազմակետ բաշխված նմուշառում նմուշի մակերեսի վրա:

5. Այլ սարքեր՝ բեռնարկղեր կենդանիների տեղափոխման և բուծման համար, ինչպիսիք են վանդակները կամ ձկան տանկերը:Նախ դիտեք կամ հասկացեք տարայի մեջ պահվող և բուծված կենդանիների հատուկ տեսակները և հավաքեք շվաբրի նմուշներ տարայի ներքին պատին կամ պարունակության հեղուկ նմուշները:

6. Հավաքեք աերոզոլի նմուշներ այն վայրերում, որտեղ մարդիկ հավաքվում են, վատ օդափոխվող տեղական առևտրային տարածքներում, գրասենյակներում և հանգստի սենյակներում:

II. Նմուշառման գործիքներ
1. Արյան հավաքման խողովակ
Եթե ​​Ձեզ անհրաժեշտ է ավելի ուշ կատարել նուկլեինաթթվի և հակակոագուլանտների նմուշներ, խորհուրդ է տրվում արյուն հավաքելու համար օգտագործել EDTA հակամակարդիչ պարունակող վակուումային արյունատար անոթ;Շիճուկի նմուշների համար խորհուրդ է տրվում օգտագործել վակուումային արյունատար անոթ առանց հակակոագուլանտի:

2. Նմուշառման շվաբր

Կալցիումի ալգինատե շվաբրերի կամ փայտե ձողերով շվաբրերի փոխարեն խորհուրդ է տրվում օգտագործել պոլիպրոպիլենային շվաբրեր, քանի որ դրանք կարող են պարունակել նյութեր, որոնք ապաակտիվացնում են որոշ վիրուսներ և արգելակում PCR թեստը:Բամբակյա գլխիկներով շվաբրերը չեն կարող օգտագործվել, քանի որ բամբակյա մանրաթելերն ունեն սպիտակուցի ուժեղ կլանումը և հեշտությամբ չեն թափվում հետագա պահպանման լուծույթի մեջ:

«Նոր կորոնավիրուսի նուկլեինաթթուների 10-ը 1-ում խառը հավաքման և հայտնաբերման տեխնիկական բնութագրերում» հստակ ամրագրված է, որ «նմուշառման շվաբրը պետք է պատրաստված լինի պոլիեսթերից, նեյլոնից և այլ ոչ բամբակյա և ոչ կալցիումի ալգինատ նյութերից, իսկ բռնակը ոչ փայտից։Ճեղքման կետը շվաբրի գլխի վերևից մոտ 3 սմ է, որը հեշտությամբ կոտրվում է»:

ԱՄՆ-ի CDC-ն նաև նշել է. «Օգտագործեք միայն սինթետիկ մանրաթելից շվաբրեր՝ պլաստմասե կամ մետաղալարերի լիսեռներով:Մի օգտագործեք կալցիումի ալգինատե շվաբրեր կամ փայտե լիսեռներով շվաբրեր,քանի որ դրանք կարող են պարունակել նյութեր, որոնք ապաակտիվացնում են որոշ վիրուսներ և արգելակում PCR թեստը:

Ներկայումս լայնորեն օգտագործվում է մեկանգամյա օգտագործման ստերիլ նեյլոնե փաթաթվող շվաբրը՝ համակցված պլաստիկ ձողով:Հավաքվող շվաբրն ունի ավելի լավ ջրի կլանման և ազատման արագություն:Ըստ նմուշառման տարբեր վայրերի՝ շվաբրի գլուխը նույնպես ունի տարբեր չափսեր և մանրաթելեր:Հաստությունը.»

3. Նմուշի փոխադրման պահպանման լուծում

Վիրուսների ապաակտիվացման պահպանման լուծույթ. գուանիդինի աղի համապատասխան քանակությունը և վիրուսի լիզի տարբեր բաղադրիչները կարող են ուղղակիորեն լիզել վիրուսը՝ ազատելու նուկլեինաթթու, ապաակտիվացնել RNase-ն և DNase-ը և ապահովել նուկլեինաթթվի ամբողջականությունը, որը կարող է օգտագործվել հետագա qPCR հայտնաբերման համար:Այն չի կարող օգտագործվել վիրուսների մշակման և մեկուսացման համար:

Վիրուսի տեղափոխման և պահպանման լուծույթ. պարունակում է աղեր, ամինաթթուներ, վիտամիններ, գլյուկոզա և վիրուսի գոյատևման համար անհրաժեշտ սպիտակուցներ, որոնք կարող են պահպանել վիրուսի ակտիվությունը:Այն կարող է օգտագործվել ապագայում նուկլեինաթթվի արդյունահանման և վիրուսի հայտնաբերման համար, ինչպես նաև կարող է օգտագործվել վիրուսի աճեցման և տարանջատման համար:

4. Նմուշի պահպանման խողովակ և նմուշի տոպրակ

Նմուշի պահպանման խողովակը պետք է լինի ստերիլ պլաստիկ խողովակ՝ պտուտակային գլխարկով, որը չի ներծծում նուկլեինաթթուն:Յուրաքանչյուր նմուշի խողովակ պետք է ծածկված լինի նմուշի պարկով, որպեսզի կանխվի նմուշի արտահոսքը և աղտոտումը:

III.Նմուշի մեջ խանգարող նյութեր

Խոչընդոտող նյութեր PCR փորձերում

1. էնդոգեն ինտերֆերենտ

Մարմնի նմուշում առկա նյութերը կարող են խանգարել այլ նյութերի հայտնաբերմանը:

Արյուն:հեմ (>1մգ/մլ), հեմին (>0,1նգ/մլ), տրիգլիցերիդներ, IgG և այլն;

մեզի:միզանյութ (20 մՄ);

Աթոռակ:բուսական պոլիսախարիդներ, խոլատ;

Հյուսվածք:պրոթեզերոն, կոլագեն;

Կաթպրոթեզերոն, կալցիումի իոն;

Թմրամիջոցներհակաբիոտիկներ, հակավիրուսային դեղամիջոցներ, հորմոններ և այլն:

այլ.

2. էկզոգեն ինտերֆերենտ

Այն գալիս է նյութերից, որոնք կարող են խանգարել այլ նյութերի հայտնաբերմանը in vitro-ում:Նմուշի հավելումներ և նյութեր, որոնց հետ կարելի է շփվել նմուշների հավաքման և մշակման ժամանակ.

Փորձարկման պարագաներՇիճուկի բաժանման գել, նմուշների հավաքման տարա և ռետինե խցան, կաթետեր, կաթետերի լվացման հեղուկ, ձեռնոցների փոշի և այլն:

Հակակագուլանտհեպարին (>0,1 U/mL), EDTA (> 0,5 մՄ) և այլն;

Օրգանական լուծիչներԻզոպրոպանոլ (>0,1 IU/ml), բետաին, դիմեթիլ սուլֆօքսիդ, ֆորմամիդ, գլիցերին, PEG և այլն;

Ախտահանիչներսպիրտներ (էթանոլ>1%), ալդեհիդներ, ֆենոլներ (ֆենոլ>0,2%), պերօքսիդներ, ուժեղ թթուներ (HCL), ուժեղ ալկալիներ (NaOH) և այլն;

Լվացող միջոց:SDS (>0,005%);

Հող՝ հումուս

Ներկանյութ: Ինդիգո

այլ.

Բացօթյա նմուշառման իրական պայմաններում, ինչպես օրինակ՝ շրջակա միջավայրի նմուշների հավաքագրումը, նմուշները կարող են պարունակել մի շարք խանգարող նյութեր, և միջամտող նյութերի բաղադրությունը յուրաքանչյուր վայրում տարբեր է, ինչը պահանջում է PCR միջամտության փորձերի իրականացում տեղական պայմաններին համապատասխան:

IV.Նմուշների պահպանման և տեղափոխման պայմանները

Թարմ հավաքված կլինիկական նմուշները պետք է ուղարկվեն լաբորատորիա հավաքումից հետո 2-ից 4 ժամվա ընթացքում 2°C-ից 8°C ջերմաստիճանում:Պահել 4℃ ջերմաստիճանում 24 ժամվա ընթացքում։Վիրուսի մեկուսացման և նուկլեինաթթվի հայտնաբերման համար օգտագործվող նմուշները պետք է հնարավորինս շուտ փորձարկվեն:Նմուշները, որոնք կարող են փորձարկվել 24 ժամվա ընթացքում, կարող են պահվել 4°C ջերմաստիճանում;Այն նմուշները, որոնք հնարավոր չէ հայտնաբերել 24 ժամվա ընթացքում, պետք է պահվեն -70°C կամ ցածր ջերմաստիճանում (եթե ոչ- Պահել 70°C ջերմաստիճանում, սառնարանում -20°C ջերմաստիճանում):

Ամփոփում:Նմուշների ստանդարտացված հավաքումը, փոխադրումը և պահպանումը կարևոր են հետագա փորձարկման համար:Շատ լաբորատոր թեստերի կեղծ բացասական արդյունքը պայմանավորված է նմուշների ոչ պատշաճ հավաքագրմամբ, տեղափոխմամբ և պահպանմամբ, ինչը հանգեցնում է վիրուսային նուկլեինաթթվի քայքայմանը:Այնուամենայնիվ, շատ լաբորատորիաներ դեռևս անտեսում են նմուշառման կարևորությունը:Հուսով եմ, որ այս հոդվածը կարող է արթնացնել բոլորի ուշադրությունը նմուշառման վրա և դարձնել ավելի գիտական ​​և ողջամիտ նմուշառում:

Առնչվող ապրանք.

SARS-CoV-2 Տարբերակ նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հավաքածու (I) (Multiplex PCR լյումինեսցենտային հետազոտության մեթոդ) - Բրազիլիայից, Հարավային Աֆրիկայից և Մեծ Բրիտանիայից մուտանտների հայտնաբերման համար