ՀՏՀ-ի համարԿենդանիների ընդհանուր RNA մեկուսացման հավաքածու

Հետևյալ վերլուծությունը այն խնդիրների մասին, որոնց կարող եք հանդիպելկենդանական հյուսվածքի/բջջային ՌՆԹ-ի արդյունահանում will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

ՌՆԹ-ն չի արդյունահանվում կամ ՌՆԹ-ի ելքը ցածր է

Հաճախ կան մի շարք գործոններ, որոնք ազդում են վերականգնման արդյունավետության վրա, ինչպիսիք են՝ հյուսվածքների նմուշի ՌՆԹ-ի պարունակությունը, գործողության եղանակը, լուծույթի ծավալը և այլն:

1. Գործողության ընթացքում կատարվել է սառցե լոգանք կամ կրիոգեն (4 °C) ցենտրիֆուգացիա:

Առաջարկություն. Աշխատեք սենյակային ջերմաստիճանում (15-25°C) ողջ գործընթացի ընթացքում, մի սառույցով լոգանք մի արեք և ցածր ջերմաստիճանում ցենտրիֆուգեք:

2. Նմուշի ոչ պատշաճ պահպանում կամ նմուշների պահպանման չափազանց մեծ ժամանակ:

Առաջարկություն. Նմուշները պահել -80 °C ջերմաստիճանում կամ սառեցնել հեղուկ ազոտի մեջ և խուսափել սառեցման և հալեցման կրկնակի օգտագործումից:փորձեք օգտագործել թարմ հյուսվածք կամ մշակված բջիջներ ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար:

3. Անբավարար նմուշի լիզ:

Առաջարկություն. Հյուսվածքը միատարրացնելիս համոզվեք, որ հյուսվածքը բավականաչափ համասեռացված է, և որ հյուսվածքային բջիջները բավականաչափ պառակտված են՝ բացատրելու ՌՆԹ-ի արտազատումը:

4. Էլյուենտը ճիշտ չի ավելացվել։

Առաջարկություն. Հաստատեք, որ RNase-Free ddH₂O-ն ավելացվում է կաթիլ-կաթիլային մաքրման սյունակի թաղանթի մեջտեղում:

5. Բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը չի ​​ավելացվել Buffer RL2-ին կամ Buffer RW2-ին:

Առաջարկություն. Հետևեք հրահանգներին, ավելացրեք բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը Buffer RL2 և Buffer RW2 և լավ խառնեք նախքան հավաքածուն օգտագործելը:

6. Հյուսվածքի նմուշի չափաբաժինը տեղին չէ:

Առաջարկություն. Օգտագործեք 10-20 մգ հյուսվածք կամ (1-5) × 10⁶բջիջները մեկ 500 μl բուֆերային RL1-ի համար, քանի որ հյուսվածքների չափազանց մեծ օգտագործումը կարող է հանգեցնել ՌՆԹ-ի արդյունահանման կրճատման:

7. Սխալ զտման ծավալը կամ թերի էլյուցիան:

Առաջարկություն. Մաքրման սյունակի արտանետման ծավալը 50-200 մկլ է;եթե էլյուցիոն էֆեկտը գոհացուցիչ չէ, խորհուրդ է տրվում երկարացնել սենյակային ջերմաստիճանի տեղադրման ժամանակը նախապես տաքացված RNase-Free ddH ավելացնելուց հետո:₂O, օրինակ՝ 5-10 րոպե:

8. Մաքրման սյունակն ունի էթանոլի մնացորդ բուֆերային RW2 լվացումից հետո:

Առաջարկություն. Եթե բուֆերային RW2 լվացումից հետո էթանոլի մնացորդ կա, դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգումը 1 րոպեով, դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգման գործողության ժամանակը կարող է ավելացվել մինչև 2 րոպե, կամ մաքրման սյունը կարող է տեղադրվել սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե՝ մնացորդային էթանոլը պատշաճ կերպով հեռացնելու համար:

Մաքրված ՌՆԹ-ն քայքայվում է

Մաքրված ՌՆԹ-ի որակը կապված է այնպիսի գործոնների հետ, ինչպիսիք են նմուշի պահպանումը, RNase-ի աղտոտումը և մանիպուլյացիան և այլն:

1. Հյուսվածքների նմուշները ժամանակին չեն պահվում։

Առաջարկություն. Եթե հյուսվածքների նմուշները կամ բջիջները հավաքագրելուց հետո ժամանակին չեն օգտագործվում, անմիջապես կրիոպահպանեք -80 °C կամ հեղուկ ազոտով:ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար հնարավորության դեպքում օգտագործեք նոր վերցված հյուսվածք կամ բջիջ:

2. Հյուսվածքների նմուշների կրկնվող սառեցում-հալեցում:

Առաջարկություն. Հյուսվածքների նմուշները պահելու ժամանակ ավելի լավ է դրանք փոքր կտորների կտրել պահպանման համար, իսկ դրանց օգտագործման ժամանակ հեռացնել դրանցից մեկը՝ նմուշի կրկնվող սառեցումից-հալեցումից և ՌՆԹ-ի քայքայումից խուսափելու համար:

3. Վիրահատության ընթացքում RNase ներմուծված է կամ չկրելով միանգամյա օգտագործման ձեռնոցներ, դիմակներ և այլն:

Առաջարկություն. ՌՆԹ արդյունահանման փորձերը լավագույնս կատարվում են ՌՆԹ-ի մանիպուլյացիայի առանձին սենյակներում, և աղյուսակը մաքրվում է փորձից առաջ:

Փորձի ընթացքում կրեք միանգամյա օգտագործման ձեռնոցներ և դիմակներ, որպեսզի նվազագույնի հասցնեք ՌՆԹ-ի քայքայումը, որն առաջանում է RNase-ի ներդրմամբ:

4. Օգտագործման ընթացքում ռեակտիվները աղտոտվում են RNase-ով:

Առաջարկություն. Փոխարինեք նոր Կենդանիների ընդհանուր ՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուով համապատասխան փորձերի համար:

5. ՌՆԹ մանիպուլյացիայի ժամանակ օգտագործվող ցենտրիֆուգային խողովակները, ծայրերը և այլն, աղտոտված են RNase-ով:

Առաջարկություն. Հաստատեք, որ ցենտրիֆուգային խողովակները, ծայրերը, պիպետները և այլն, որոնք օգտագործվում են ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար, բոլորը RNase-ից զերծ են:

Մաքրված ստացված ՌՆԹ-ն ազդում է ներքևում գտնվող փորձերի վրա

Մաքրման սյունակով մաքրված ՌՆԹ-ն, եթե աղի իոնները, սպիտակուցի պարունակությունը չափազանց մեծ է, կազդի ներքևի փորձի վրա, ինչպիսիք են՝ հակադարձ տառադարձումը, Հյուսիսային Բլոտ և այլն:

1. Էլյուացված ՌՆԹ-ն ունի աղի իոնների մնացորդներ:

Առաջարկություն. Հաստատեք, որ էթանոլի ճիշտ ծավալը ավելացվել է Buffer RW2-ին և կատարեք 2 մաքրման սյունակի լվացում շահագործման համար նշված կենտրոնախույս արագությամբ.եթե կա աղի իոնների մնացորդ, ապա մաքրման սյունը թողեք բուֆերային RW2 5 րոպե սենյակային ջերմաստիճանում և կատարեք ցենտրիֆուգում՝ աղի աղտոտումը առավելագույնի հասցնելու համար:

2. Էթանոլի մնացորդը զտված ՌՆԹ-ում:

Առաջարկություն. Հաստատեք, որ RW2 բուֆերային լվացումից հետո դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգման գործողությունը կատարեք շահագործման համար նշված ցենտրիֆուգման արագությամբ, ավելացրեք դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգման գործողության ժամանակը մինչև 2 րոպե, եթե դեռ կա էթանոլի մնացորդ, կամ թողեք սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե դատարկ խողովակի նորից ցենտրիֆուգումից հետո՝ առավելագույնի հասցնելու համար:

Նուլցեինաթթվի նմուշների տեսակների մեկուսացում

Foregene-ի ՌՆԹ-ի մեկուսացման փաթեթները կարող են ստանալ ՌՆԹ-ի ընդհանուր մեկուսացում/արդյունահանում հետևյալ նմուշների աղբյուրներից՝ կենդանական հյուսվածք, բույսեր, բջիջներ, վիրուսներ, արյուն և այլն:

Ինչպես պահել հանդերձանքը

Պահպանում սենյակային ջերմաստիճանում 24 ամիս: