Մաքրման սյունը խցանված է

Այս փաթեթում, գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման գործողության մեջ, մաքրման սյունակը ուղղակիորեն կլանվում է նմուշի ֆերմենտային լիզի խառնուրդի վրա՝ առանց ցենտրիֆուգման փուլի, և մաքրման սյունը կարող է արգելափակվել թերի ֆերմենտացման և նմուշի բարձր մածուցիկության պատճառով:

Հետևյալ հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Հյուսվածքների նմուշների ոչ ամբողջական ֆերմենտային մարսողություն:

Առաջարկություն. Foregene Protease-ի նմուշի մշակման ժամանակը կարող է պատշաճ կերպով երկարաձգվել կամ վերին նյութը կարող է վերցվել ցենտրիֆուգումից հետո 12,000 rpm (~13,400 × g) 5 րոպեի ընթացքում:

2. Հյուսվածքների նմուշների կամ մեծ հյուսվածքների չափից ավելի օգտագործումը:

Առաջարկություն. Նմուշում ավելի լավ է չգերազանցել 1 բուկալային շվաբրը;եթե նմուշը չափազանց մեծ է, համապատասխանաբար ավելացրեք բուֆեր ST1, Foregene Protease, բուֆեր ST2 դեղաչափը:

3. Նմուշի մածուցիկությունը չափազանց բարձր է:

Առաջարկություն. Նախքան գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանումը, նմուշները կարող են պատշաճ կերպով նոսրացնել 10 մՄ տրիս-HCl-ով:

4. Արյան քարտի բեկորներ են ծծվել։

Առաջարկություն. Արյան բծերի (FTA Card) գենոմային արդյունահանման 6-րդ քայլի անցողիկ ցենտրիֆուգման ժամանակը կարող է համապատասխան կերպով երկարաձգվել:

Ցածր եկամտաբերություն կամ ԴՆԹ-ի բացակայություն

Հաճախ կան մի շարք գործոններ, որոնք ազդում են գենոմային ԴՆԹ-ի վրա, ներառյալ նմուշի ծագումը, նմուշների պահպանման պայմանները, նմուշի պատրաստումը, մանիպուլյացիան և այլն:

Գենոմային ԴՆԹ-ն հնարավոր չէ ստանալ արդյունահանման ժամանակ

Հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Նմուշների ոչ պատշաճ պահպանումը կամ չափազանց երկար պահպանումը հանգեցնում է գենոմի ԴՆԹ-ի քայքայման:

Առաջարկություն. Բերանի շվաբրերը գերադասելի է թարմ նմուշառել, և խորհուրդ չի տրվում օգտագործել պահածոյացված շվաբրեր՝ գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման գործողությունների համար.արյան բծերի նմուշները պետք է ապահովեն որակի որակը, և պահպանման ժամկետը չպետք է չափազանց երկար լինի:

2. Հյուսվածքների չափազանց քիչ օգտագործումը կարող է հանգեցնել համապատասխան գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման:

Առաջարկություն. Հետևեք բուկալային շվաբրի նմուշառման հրահանգներին վիրահատության ուղեցույցում և հնարավորինս շատ անգամ սրբեք, որպեսզի բերանի շվաբրին բավականաչափ բջիջներ կցվեն գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար.արյան բծի նմուշի արդյունահանման համար արյան բծի կտրման տարածքը կարող է համապատասխան կերպով մեծացնել:

3. Foregene Protease-ը ոչ պատշաճ կերպով պահպանվում է, ինչի հետևանքով նվազում է նրա ակտիվությունը կամ ապաակտիվացումը:

Առաջարկություն. Հաստատեք Foregene Protease-ի պահպանման պայմանները կամ փոխարինեք այն նոր Foregene Protease-ով ֆերմենտային ռեակցիայի համար:

4. Կոմպլեկտի սխալ պահպանումը կամ պահպանման ժամանակը չափազանց երկար է, ինչի հետևանքով հանդերձում որոշ բաղադրիչներ խափանվում են:

Առաջարկություն. Գնեք բուկալային շվաբրի ԴՆԹ-ի մեկուսացման նոր հավաքածու՝ համապատասխան ընթացակարգերի համար:

5. Բուֆերային ՀԲ-ն բացարձակ էթանոլ չի ավելացնում:

Առաջարկություն. Հաստատեք, որ բուֆերային WB-ն ավելացնում է բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը:

6. Էլյուենտը ճիշտ չի ավելացվել սիլիկոնե թաղանթին:

Առաջարկություն. 65 °C նախապես տաքացված էլուենտի կաթիլներ ավելացրեք սիլիկոնե թաղանթի մեջտեղում և թողեք սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե, որպեսզի բարձրացնեք արտանետման արդյունավետությունը:

Մեկուսացված է ցածր բերքատվության գենոմային ԴՆԹ

Հետևյալ հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Նմուշների ոչ պատշաճ պահպանումը կամ չափազանց երկար պահպանումը հանգեցնում է գենոմի ԴՆԹ-ի քայքայման:

Առաջարկություն. Բերանի շվաբրերը նախընտրելի է թարմ նմուշառել, և պահպանված շվաբրերը չպետք է օգտագործվեն գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար:

2. Եթե հյուսվածքի նմուշի քանակը չափազանց փոքր է, արդյունահանված գենոմային ԴՆԹ-ի պարունակությունը ավելի քիչ կլինի:

Առաջարկություն. Հետևեք գործառնական ուղեցույցում բերված շվաբրի նմուշառման ցուցումներին՝ հնարավորինս շատ անգամ սրբելով, որպեսզի բերանի շվաբրին կարողանան ամրացնել գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար բավարար քանակությամբ բջիջներ:

3. Foregene Protease-ը ոչ պատշաճ կերպով պահպանվում է, ինչի հետևանքով նվազում է նրա ակտիվությունը կամ ապաակտիվացումը:

Առաջարկություն. Հաստատեք Foregene Protease-ի պահպանման պայմանները կամ փոխարինեք այն նոր Foregene Protease-ով ֆերմենտային ռեակցիայի համար:

4. Էլյուենտի խնդիրներ.

Առաջարկություն. Օգտագործեք բուֆերային EB էյուցիայի համար;եթե օգտագործում եք ddH₂O կամ այլ էլուենտներ, հաստատեք, որ լուծույթի pH-ը գտնվում է 7,0-8,5 միջակայքում:

5. Էլուատը ճիշտ չի ավելացվել կաթիլային եղանակով:

Առաջարկություն. Ավելացրեք էլուենտի կաթիլներ սիլիկոնե թաղանթի մեջտեղում և թողեք սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե՝ զտման արդյունավետությունը բարձրացնելու համար:

6. Էլյուցիոն հեղուկը շատ քիչ է կուտակվում։

Առաջարկություն. Օգտագործեք էլուենտ գենոմային ԴՆԹ-ի լուծարման համար, ինչպես պահանջվում է հրահանգներում, առնվազն 15 մկլ-ից ոչ պակաս:

Մեկուսացված գենոմային ԴՆԹ-ի ցածր մաքրություն

Ցածր գենոմային ԴՆԹ-ի մաքրությունը կարող է հանգեցնել ներքևում գտնվող փորձերի ձախողման կամ անբավարար արդյունքների, ինչպիսիք են.

Հնարավոր պատճառները հետևյալն են.

1. Հետերոպրոտեինային աղտոտում, ՌՆԹ-ի աղտոտում:

Վերլուծություն. մաքրման սյունը չի լվացվել բուֆերային PW-ի միջոցով;Buffer PW լվացման մաքրման սյունակը չի լվացվել՝ օգտագործելով ճիշտ կենտրոնախույս արագությունը:

Առաջարկություն. Էթանոլ ավելացնելուց առաջ համոզվեք, որ վերին հեղուկում տեղումներ չկան.համոզվեք, որ լվացեք մաքրման սյունը հրահանգների համաձայն, և այս քայլը չի ​​կարող բաց թողնել:

2. Կեղտոտ իոնային աղտոտում.

Վերլուծություն. Բուֆերային WB լվացման մաքրման սյունակը բաց է թողնվել կամ լվացվել է միայն մեկ անգամ, ինչը հանգեցրել է մնացորդային իոնային աղտոտման:

Առաջարկություն. Համոզվեք, որ լվացեք Buffer WB-ն 2 անգամ, ինչպես նշված է, մնացորդային իոնները հնարավորինս հեռացնելու համար:

3. ՌՆԹ ֆերմենտային աղտոտում:

Վերլուծություն. օտարերկրյա RNase-ները ավելացվել են բուֆերին;Բուֆերային PW-ի լվացման գործողությունը սխալ էր, ինչը հանգեցրեց RNase-ի մնացորդներին, որոնք ազդում էին ՌՆԹ-ի ներքևի փորձարարական գործողությունների վրա, ինչպիսիք են in vitro արտագրումը:

Առաջարկություն. Foregene սերիայի նուկլեինաթթվի մեկուսացման հավաքածուները կարող են հեռացնել ՌՆԹ-ն առանց RNase-ի լրացուցիչ ավելացման, հետևաբար, բուկալային շվաբի/FTA քարտի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուն չպետք է ավելացնի RNase;Համոզվեք, որ հետևեք Buffer PW լվացման մաքրման սյունակի հրահանգներին, և այս քայլը չի ​​կարող բաց թողնել:

4. Էթանոլի մնացորդ:

Վերլուծություն. Բուֆերային WB-ն չի կատարել դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգացիա մաքրման սյունը լվանալուց հետո:

Առաջարկություն. Կատարեք ճիշտ դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգման գործողությունը՝ համաձայն հրահանգների:

5. Այլ կեղտոտ աղտոտում:

Վերլուծություն. Պահպանված նմուշները կամ հատուկ նմուշները չեն ենթարկվում նախնական մշակման:

Առաջարկություն. Մանրակրկիտ նախապես մշակեք նմուշը, ինչպես հրահանգված է: