Խնդրի վերլուծության ուղեցույց

Հետևյալ վերլուծությունը այն խնդիրների մասին, որոնց կարող եք հանդիպելԲույսերի ընդհանուրRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

Պտտվող սյունը խցանված է

Սպինի սյունակի արգելափակումը կհանգեցնի նրան, որ ՌՆԹ-ի ելքը կնվազի կամ նույնիսկ չկարողանա մաքրվել ՌՆԹ ստանալու համար, իսկ ստացված ՌՆԹ-ի որակը ցածր կլինի:

Ընդհանուր պատճառների վերլուծություն.

1. Նմուշը ամբողջությամբ կոտրված չէ:

Նմուշի թերի մասնատումը կարող է արգելափակել ԴՆԹ մաքրող սյունը, ինչը կարող է նաև ազդել ՌՆԹ-ի ստացման և որակի վրա:Մենք խորհուրդ ենք տալիս նմուշների մասնատման ժամանակ արագ մանրացնել հեղուկ ազոտի բավարար քանակություն, որպեսզի հնարավորինս կոտրվեն հյուսվածքները, ինչպիսիք են բջջի պատերը և նմուշների բջջային թաղանթները:Պոլիֆենոլային պոլիսախարիդների բույսերի նմուշների համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել Plant Total RNA Isolation Kit Plus-ը:

2. Ասպիրատեք ԴՆԹ- Մաքրող Սյունակի մեկուսացված վերին նյութը, ասպիրացրեք հնարավոր բջիջների մնացորդները:

Բջջային մնացորդների ասպիրացված կարկուտը կարող է խցանել միայն ՌՆԹ-ով սյունակը ՌՆԹ-ի կլանման պրոցեդուրաների ժամանակ (տես ընթացակարգի 5-րդ քայլը, պոլիսախարիդային պոլիֆենոլի ընթացակարգի քայլ 6-ը):Մենք խորհուրդ ենք տալիս, որ պետք է զգույշ լինել այս վերին նյութը ասպիրացիայի ժամանակ, որպեսզի խուսափեն բջջային մնացորդներից ասպիրացիայից:

3. Նմուշի սկզբնական քանակը չափազանց մեծ է:

Նմուշի չափից ավելի օգտագործումը կհանգեցնի նմուշի թերի մասնատմանը կամ բջիջների թերի լիզմանը բուֆերային PRL1-ի կամ բուֆերային PSL1-ի կողմից, ինչը կհանգեցնի մաքրման գործողությունների խցանված մաքրման սյունակին:Plant Total RNA Isolation Kit-ն ունի նախնական առավելագույնը 50 մգ մեկ վիրահատված նմուշի մեկ մաքրման համար:Պոլիֆենոլային պոլիսախարիդների բույսերի նմուշների համար խորհուրդ ենք տալիս փորձել Plant Total RNA Isolation Kit Plus-ը:

4. Ցենտրիֆուգի ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է:

Ամբողջ ՌՆԹ-ի մեկուսացումը և մաքրումը, բացառությամբ նմուշի հյուսվածքի հեղուկ ազոտի խախտման, բոլոր քայլերն իրականացվում են սենյակային ջերմաստիճանում (20-25 °C):Ցածր ջերմաստիճանի որոշ ցենտրիֆուգներ ունեն 20 °C-ից ցածր ջերմաստիճան, ինչը կարող է խցանումներ առաջացնել ԴՆԹ մաքրող սյունակում և/կամ միայն ՌՆԹ-ով սյունակում:Եթե ​​դա տեղի ունենա, ցենտրիֆուգի ջերմաստիճանը սահմանեք 20-25 °C և նախապես տաքացրեք լիզի խառնուրդը և/կամ էթանոլի տարանջատման վերին նյութի ավելացումը մինչև 37 °C:

Ոչ մի ՌՆԹ արդյունահանված կամ ՌՆԹ-ի ելքը ցածր է

Սովորաբար կան բազմաթիվ գործոններ, որոնք ազդում են վերականգնման արդյունավետության վրա, ինչպիսիք են՝ նմուշի ՌՆԹ-ի պարունակությունը, գործողության մեթոդը, լուծույթի ծավալը և այլն:

Ընդհանուր պատճառների վերլուծություն հետևյալ կերպ.

1. Վիրահատության ընթացքում կատարվել է սառցե լոգանք կամ ցածր ջերմաստիճանի (4°C) ցենտրիֆուգացիա:

Առաջարկ. Ամբողջ գործընթացում աշխատեք սենյակային ջերմաստիճանում (15-25°C), մի արեք սառցե լոգանք և ցածր ջերմաստիճանի ցենտրիֆուգացիա:

       2.ՌՆԹ-ն քայքայվել է նմուշի ոչ պատշաճ պահպանման կամ նմուշի երկարաժամկետ պահպանման պատճառով:

Առաջարկություն. Թարմ հավաքված նմուշները պետք է արագ սառեցվեն հեղուկ ազոտի մեջ, այնուհետև երկար ժամանակ պահպանվեն -80°C ջերմաստիճանում, խուսափել նմուշների կրկնակի սառեցումից և հալվելուց:կամ անմիջապես ներծծում են նմուշները RNA կայունացուցիչ RNAlater լուծույթում (կենդանիների նմուշներ):

       3.Նմուշի անբավարար մասնատումը և լիզիսը հանգեցնում են մաքրման սյունակի արգելափակմանը:

Առաջարկ. Հյուսվածքը մանրացնելիս համոզվեք, որ հյուսվածքը բավականաչափ մանրացված է և արագ տեղափոխեք այն նախապես պատրաստված բուֆեր PSL1 (հաստատեք, որ β-ME-ի ճիշտ համամասնությունն ավելացվել է, տես ընթացակարգի 1-ին քայլը):

4. Էլյուենտը սխալ է ավելացվել:

Առաջարկ. Համոզվեք, որ RNase-Free ddH₂O-ն կաթում է մաքրման սյունակի թաղանթի մեջտեղում:

5. Բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը չի ​​ավելացվել Buffer PSL2-ին կամ Buffer PRW2-ին:

Առաջարկ. Խնդրում ենք հետևել հրահանգներին, ավելացնել բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը Buffer PSL2 և Buffer PRW2 և լավ խառնել մինչև փաթեթը օգտագործելը:

6. Հյուսվածքի նմուշի քանակը անհամապատասխան է:

Առաջարկ. Օգտագործեք 50 մգ հյուսվածք 500 մկլ բուֆեր PSL1-ի համար:Չափից շատ հյուսվածքի օգտագործումը կնվազեցնի արդյունահանվող ՌՆԹ-ի քանակությունը, իսկ արդյունքում ստացված ՌՆԹ-ի մաքրությունը նույնպես կնվազի:Մենք խստորեն խորհուրդ ենք տալիս, որ նախնական նմուշի չափաբաժինը չպետք է գերազանցի 50 մգ-ը մեկ ՌՆԹ-ի արդյունահանման գործողության համար:

7. Էլյուցիայի ոչ պատշաճ ծավալը կամ թերի էլյուցիան:

Առաջարկություն. Մաքրման սյունակի էլուենտի ծավալը 50-200 մկլ է;եթե էլյուցիոն էֆեկտը գոհացուցիչ չէ, խորհուրդ է տրվում երկարացնել ժամանակը սենյակային ջերմաստիճանում նախապես տաքացված RNase-Free ddH ավելացնելուց հետո:₂O, օրինակ՝ 5-10 րոպե:

8. Մաքրման սյունը ունի էթանոլի մնացորդ բուֆեր PRW2-ով լվանալուց հետո:

   Առաջարկ. Եթե դատարկ խողովակը ցենտրիֆուգվում է 1 րոպե, և բուֆեր PRW2-ում լվանալուց հետո դեռ մնացել է էթանոլ, կարող եք դատարկ խողովակի ցենտրիֆուգման ժամանակը հասցնել 2 րոպեի, կամ մաքրման սյունը տեղադրել սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե՝ մնացորդային էթանոլը լիովին հեռացնելու համար:

9. Կոմպլեկտը սխալ է օգտագործվել:

   Առաջարկ. Պոլիֆենոլային պոլիսախարիդների բույսերի նմուշների համար սովորական փաթեթների օգտագործումը, ինչպիսին է Plant Total RNA Isolation Kit-ը, կարող է չկարողանալ ստանալ իդեալական ՌՆԹ նմուշներ:Խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել Plant Total RNA IsolationKit Plus-ը, որը հատուկ նախագծված է պոլիֆենոլային պոլիսախարիդային բույսերի նմուշների համար:Հավաքածու, որը հատուկ մշակվել է պոլիֆենոլից և պոլիսախարիդային բույսերի նմուշներից ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար:

OD260/OD280 արժեքը ցածր է

ՌՆԹ-ի էլյուցիան ddH-ով₂O-ն և օգտագործվում է սպեկտրոֆոտոմետրի ընթերցումների համար, հանգեցնում է ցածր OD260/OD280 արժեքների:Խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել 10 մմ տրիս-HCl, pH 7,5 (ռանց RNase-ի ddH-ի փոխարեն₂O ՌՆԹ-ի արտանետման համար) համեմատաբար ճիշտ OD260/OD280 արժեքներ ստանալու համար տե՛ս «ՌՆԹ-ի համակենտրոնացման և մաքրման փորձարկումները» էջ 19-ում:

Մաքրված ՌՆԹ-ն քայքայվում է

Մաքրված ՌՆԹ-ի որակը կապված է այնպիսի գործոնների հետ, ինչպիսիք են նմուշի պահպանումը, RNase-ով աղտոտվածությունը և մանիպուլյացիան:

Ընդհանուր պատճառների վերլուծություն.

1. Հյուսվածքների նմուշները հավաքագրվելուց հետո ժամանակին չեն պահպանվել:

    Առաջարկություն. Եթե հյուսվածքների նմուշները հավաքելուց հետո ժամանակին չեն օգտագործվում, խնդրում ենք դրանք անմիջապես պահել հեղուկ ազոտի մեջ ցածր ջերմաստիճանում կամ տեղափոխել դրանք -80°C երկարաժամկետ պահպանման համար հեղուկ ազոտում արագ սառչելուց հետո, կամ անմիջապես ընկղմել նմուշները ՌՆԹ կայունացուցիչ RNAlater լուծույթում (կենդանիների նմուշներ):ՌՆԹ արդյունահանման համար փորձեք օգտագործել թարմ հավաքված հյուսվածքների նմուշներ:

2. Հյուսվածքների նմուշների կրկնվող սառեցում և հալեցում:

   Առաջարկ. Հյուսվածքների նմուշները պահելու ժամանակ ավելի լավ է դրանք մանր կտրատել պահպանման համար և օգտագործելիս դրանց մի մասը հանել՝ խուսափելու համար նմուշների կրկնակի սառեցման և հալման հետևանքով առաջացած ՌՆԹ-ի քայքայումից:

3.RNase-ը ներդրված է վիրահատարանում կամ չի կրում միանգամյա օգտագործման ձեռնոցներ, դիմակներ և այլն:

   Առաջարկ. ՌՆԹ-ի արդյունահանման փորձերը լավագույնս կատարվում են ՌՆԹ-ի առանձին գործողություններում, և լաբորատոր սեղանը պետք է մաքրվի փորձից առաջ, և փորձի ընթացքում պետք է կրել միանգամյա օգտագործման ձեռնոցներ և դիմակներ՝ RNase-ի ներմուծման հետևանքով առաջացած ՌՆԹ-ի մեծ չափով դեգրադացիայից խուսափելու համար:

4. Օգտագործման ընթացքում ռեագենտը աղտոտված է RNase-ով:

   Առաջարկ. Փոխարինեք բույսերի ընդհանուր ՌՆԹ-ի արդյունահանման նոր շարքով համապատասխան փորձերի համար:

5. ՌՆԹ-ի մանիպուլյացիայի համար օգտագործվող ցենտրիֆուգային խողովակները և խողովակների ծայրերը աղտոտված են RNase-ով:

Առաջարկություն. Համոզվեք, որ ՌՆԹ-ի արդյունահանման մեջ օգտագործվող ցենտրիֆուգային խողովակները, խողովակների ծայրերը, պիպետները և այլն, բոլորն էլ չունեն RNase:

Հրահանգների ձեռնարկներ.

Plant Total RNA Isolation Kit Հրահանգների ձեռնարկ