Foreasy Taq ԴՆԹ պոլիմերազ
Նկարագրություն
Foreasy Taq DNA Polymerase-ը նոր Taq ֆերմենտ է, որն արտահայտված է Escherichia coli ինժեներական բակտերիաներում գեների վերահամակցման տեխնոլոգիայով:Ֆերմենտն ինքնին ունի որոշակի տաք մեկնարկային ակտիվություն և կարող է օգտագործվել սովորական PCR-ի և qPCR-ի համար;այն ունի 5'→3' ԴՆԹ պոլիմերազային ակտիվություն և 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն, բայց չունի 3'→5' էկզոնուկլեազային ակտիվություն:
Հավաքածուի բաղադրիչներ
Բաղադրիչ | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
Foreasy Taq ԴՆԹ պոլիմերազ(5 U/μL) | 5000 U (1 մլ) | 50 KU (10 մլ) | 500 KU (100 մլ) |
2× Taq Reaction Buffer | 25 մլ × 5 | 250 մլ × 5 | 500 մլ × 25 |
Առանձնահատկություններ և առավելություններ
- Բարձր սպեցիֆիկություն. ֆերմենտն ունի որոշակի տաք մեկնարկային ակտիվություն:
- Արագ ուժեղացում՝ 10 վրկ/կբ:
- Բարձր հարմարվողական ձևանմուշ. կարող է օգտագործվել արդյունավետորեն ուժեղացնելու GC Բարձր արժեք, տարբեր դժվար ուժեղացվող ԴՆԹ ձևանմուշ:
- Ուժեղ հավատարմություն՝ սովորական Taq Enzyme 6 անգամ:
- Ուժեղ ջերմային կայունություն. այն կարող է տեղադրվել 37 °C ջերմաստիճանում մեկ շաբաթ և պահպանում է ավելի քան 90% ակտիվություն
Կոմպլեկտի հավելված
Տարբեր PCR/qPCR համակարգեր և ուղղակի PCR համակարգեր
ԴՆԹ-ի բեկորների PCR ուժեղացում
ԴՆԹ պիտակավորում
ԴՆԹ-ի հաջորդականություն
PCR A-tailed
U սահմանում
1U. Ֆերմենտի քանակությունը, որն անհրաժեշտ է 10 նմոլ դեզօքսինուկլեոտիդների թթվային անլուծելի նյութի մեջ ներառելու համար՝ օգտագործելով ակտիվացված սաղմոնի սերմի ԴՆԹ-ն որպես ձևանմուշ/պրիմեր 30 րոպե 74°C ջերմաստիճանում:
Ռեակցիայի վիճակը
Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլ |
37°C | 5 րոպե | 1 |
94°C | 5 րոպե | 1 |
94°C | 10 վրկ | 35 |
60°C | 10 վրկ | |
72°C | 20 վրկ/կբ | |
72°C | 2 րոպե | 1 |
Պահպանում
-20 ± 5 °C 2 տարի կամ -80 °C՝ երկարատև պահպանման համար:
Ուժեղացման ազդանշաններ չկան
1. Կոմպլեկտի մեջ գտնվող Taq DNA պոլիմերազը կորցնում է իր ակտիվությունը ոչ պատշաճ պահպանման կամ փաթեթի ժամկետը լրանալու պատճառով:
Առաջարկություն. Հաստատեք փաթեթի պահպանման պայմանները.կրկին ավելացրեք Taq DNA պոլիմերազի համապատասխան քանակությունը PCR համակարգին կամ գնեք նոր իրական ժամանակի PCR հավաքածու համապատասխան փորձերի համար:
2. ԴՆԹ-ի կաղապարում կան Taq ԴՆԹ պոլիմերազի բազմաթիվ արգելիչներ:
Առաջարկ. Մաքրել կաղապարը կամ նվազեցնել օգտագործվող կաղապարի քանակը:
3. Mg2+ կոնցենտրացիան հարմար չէ:
Առաջարկություն. Մեր տրամադրած 2× իրական PCR խառնուրդի Mg2+ կոնցենտրացիան 3,5 մՄ է:Այնուամենայնիվ, որոշ հատուկ այբբենարանների և ձևանմուշների համար Mg2+ կոնցենտրացիան կարող է ավելի բարձր լինել:Հետևաբար, Mg2+ կոնցենտրացիան օպտիմալացնելու համար կարող եք ուղղակիորեն ավելացնել MgCl2:Օպտիմալացման համար խորհուրդ է տրվում ամեն անգամ ավելացնել Mg2+ 0,5 մՄ:
4. PCR-ի ուժեղացման պայմանները հարմար չեն, և այբբենարանի հաջորդականությունը կամ կոնցենտրացիան սխալ է:
Առաջարկ. հաստատել այբբենարանի հաջորդականության ճիշտությունը և այբբենարանը չի քայքայվել;եթե ուժեղացման ազդանշանը լավ չէ, փորձեք իջեցնել եռացման ջերմաստիճանը և պատշաճ կերպով կարգավորել այբբենարանի կոնցենտրացիան:
5. Կաղապարի քանակը չափազանց քիչ է կամ շատ:
Առաջարկություն. Կատարեք ձևանմուշի գծայինացման գրադիենտ նոսրացում և ընտրեք կաղապարի կոնցենտրացիան լավագույն PCR էֆեկտով իրական ժամանակում PCR փորձի համար:
NTC-ն ունի չափազանց բարձր լյումինեսցենտային արժեք
1. Գործողության ընթացքում առաջացած ռեագենտով աղտոտվածություն:
Առաջարկություն. Փոխարինեք նոր ռեագենտներով իրական ժամանակում PCR փորձերի համար:
2. ՊՇՌ ռեակցիայի համակարգի պատրաստման ժամանակ տեղի է ունեցել աղտոտում:
Առաջարկություն. Գործողության ընթացքում ձեռնարկել անհրաժեշտ պաշտպանիչ միջոցներ, ինչպիսիք են՝ կրել լատեքսային ձեռնոցներ, օգտագործել ֆիլտրով պիպետտի ծայրը և այլն:
3. Պրայմերները քայքայված են, և պրայմերների քայքայումը կառաջացնի ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում:
Առաջարկ. Օգտագործեք SDS-PAGE էլեկտրոֆորեզ՝ պարզելու, թե արդյոք պրայմերները քայքայված են, և դրանք փոխարինեք նոր պրայմերներով իրական ժամանակում PCR փորձերի համար:
Primer dimer կամ ոչ հատուկ ուժեղացում
1. Mg2+ կոնցենտրացիան հարմար չէ:
Առաջարկություն. Մեր տրամադրած 2× Real PCR EasyTM Mix-ի Mg2+ կոնցենտրացիան 3,5 մՄ է:Այնուամենայնիվ, որոշ հատուկ այբբենարանների և ձևանմուշների համար Mg2+ կոնցենտրացիան կարող է ավելի բարձր լինել:Հետևաբար, Mg2+ կոնցենտրացիան օպտիմալացնելու համար կարող եք ուղղակիորեն ավելացնել MgCl2:Օպտիմալացման համար խորհուրդ է տրվում ամեն անգամ ավելացնել Mg2+ 0,5 մՄ:
2. PCR կռելու ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է:
Առաջարկ. Ամեն անգամ բարձրացրե՛ք PCR եռացման ջերմաստիճանը 1℃ կամ 2℃-ով:
3. PCR արտադրանքը չափազանց երկար է:
Առաջարկություն. Իրական ժամանակում PCR արտադրանքի երկարությունը պետք է լինի 100-150 bp, ոչ ավելի, քան 500 bp:
4. Պրայմերները քայքայված են, և պրայմերների քայքայումը կհանգեցնի հատուկ ուժեղացման տեսքին:
Առաջարկ. Օգտագործեք SDS-PAGE էլեկտրոֆորեզ՝ պարզելու, թե արդյոք պրայմերները քայքայված են, և դրանք փոխարինեք նոր պրայմերներով իրական ժամանակում PCR փորձերի համար:
5. PCR համակարգը սխալ է, կամ համակարգը չափազանց փոքր է:
Առաջարկ. PCR ռեակցիայի համակարգը չափազանց փոքր է, ինչը կհանգեցնի հայտնաբերման ճշգրտության նվազմանը:Ավելի լավ է օգտագործել քանակական PCR գործիքի կողմից առաջարկվող ռեակցիայի համակարգը իրական ժամանակում PCR փորձը վերագործարկելու համար:
Քանակական արժեքների վատ կրկնելիություն
1. Գործիքը անսարք է:
Առաջարկ. գործիքի յուրաքանչյուր PCR անցքի միջև կարող են լինել սխալներ, ինչը հանգեցնում է վատ վերարտադրելիության ջերմաստիճանի կառավարման կամ հայտնաբերման ժամանակ:Խնդրում ենք ստուգել համապատասխան գործիքի ցուցումների համաձայն:
2. Նմուշի մաքրությունը լավ չէ:
Առաջարկություն. Անմաքուր նմուշները կհանգեցնեն փորձի վատ վերարտադրելիության, որը ներառում է կաղապարի և այբբենարանների մաքրությունը:Լավագույնն այն է, որ կաղապարը վերամաքրվի, իսկ այբբենարանները լավագույնս մաքրվում են SDS-PAGE-ով:
3. PCR համակարգի պատրաստման և պահպանման ժամանակը չափազանց երկար է:
Առաջարկ. Օգտագործեք Real Time PCR համակարգը PCR փորձի համար պատրաստվելուց անմիջապես հետո և մի թողեք այն շատ երկար:
4. PCR-ի ուժեղացման պայմանները հարմար չեն, և այբբենարանի հաջորդականությունը կամ կոնցենտրացիան սխալ է:
Առաջարկ. հաստատել այբբենարանի հաջորդականության ճիշտությունը և այբբենարանը չի քայքայվել;եթե ուժեղացման ազդանշանը լավ չէ, փորձեք իջեցնել եռացման ջերմաստիճանը և պատշաճ կերպով կարգավորել այբբենարանի կոնցենտրացիան:
5. PCR համակարգը սխալ է, կամ համակարգը չափազանց փոքր է:
Առաջարկ. PCR ռեակցիայի համակարգը չափազանց փոքր է, ինչը կհանգեցնի հայտնաբերման ճշգրտության նվազմանը:Ավելի լավ է օգտագործել քանակական PCR գործիքի կողմից առաջարկվող ռեակցիայի համակարգը իրական ժամանակում PCR փորձը վերագործարկելու համար: