A260/A230-ի ցածր հարաբերակցությունը սովորաբար առաջանում է 230 նմ կլանման ալիքի առավելագույն երկարությամբ կեղտերից:Տեսնենք, թե ինչ են ներառում այս կեղտերը.

• Ընդհանուր աղտոտիչներ	Կլանման ալիքի երկարությունը	Հարաբերակցության էֆեկտ
  Սպիտակուցներ	~ 230 նմ և 280 նմ	Միաժամանակյա կրճատումը Ա260 թ/A 280 թև Ա260 թ/A 280 թգործակիցները
  Գուանիդինի աղ	220-240 նմ	Կրճատել Ա260 թ/A 280 թհարաբերակցությունը
  Ֆենոլ	~ 270 նմ	-
  Տրիզոլ	~ 230 նմ և 270 նմ	Կրճատել Ա260 թ/A 280 թհարաբերակցությունը
  EDTA	~ 230 նմ	Կրճատել Ա260 թ/A 280 թհարաբերակցությունը
  Էթանոլ	230-240 նմ	Կրճատել Ա260 թ/A 280 թհարաբերակցությունը

 
 
 
Ընդհանուր աղտոտիչների կլանման ալիքի երկարությունը և հակադրություն արժեքը

Pռոտինային աղտոտում
Սպիտակուցների աղտոտումը կարելի է համարել նուկլեինաթթվի արդյունահանման գործընթացում ամենատարածված աղտոտումը:Սպիտակուցը գոյություն ունի վերին ջրային և ստորին փուլերի միջևօրգանականփուլ.Աղտոտվածությունը կնվազեցնի A260/A280 և A260/A230 հարաբերակցությունը միաժամանակ, իսկ A260/A230 հարաբերակցությունը կփոխվի ավելի ակնհայտ, քան A260/A280 հարաբերակցությունը:
Հետագա ընթացքումհակադարձ արտագրումor qPCR ռեակցիաներ, սպիտակուցի մնացորդները կարող են արգելակել կամ խանգարել ֆերմենտի գործառույթին.Սպիտակուցների աղտոտումից խուսափելու լավագույն միջոցը գերնույն նյութը ներծծելիս նկատի ունենալն է «ավելի քիչ, քան շատ, շատ անգամ փոքր քանակությամբ» սկզբունքը:

2. Գուանիդինիումի աղտոտում
հիդրոքլորիդը (GuHCl) և գուանիդին թիոցիանատը (GTC) ունեն սպիտակուցների դենատորացման ազդեցություն, որոնք կարող են արագորեն ոչնչացնել բջջային մեմբրանները նուկլեինաթթվի արդյունահանման գործընթացում՝ առաջացնելով սպիտակուցի դենատուրացիա և տեղումներ:GuHCl-ի և GTC-ի կլանման ալիքի երկարությունը 220-240 նմ է, ևմնացորդային գուանիդինի աղը կնվազեցնի A260/A230 հարաբերակցությունը.Չնայած գուանիդինիումի մնացորդային աղը կնվազեցնի հարաբերակցությունը,Հետևյալ փորձերի վրա ազդեցությունը իրականում աննշան է.

3. Տրիզոլի աղտոտում
Տրիզոլի հիմնական բաղադրիչը ֆենոլն է:Ֆենոլի հիմնական գործառույթը բջիջների լիզումն է և բջիջներում սպիտակուցների և նուկլեինաթթվի նյութերի ազատումը:Թեև ֆենոլը կարող է արդյունավետորեն ձևափոխել սպիտակուցները, այն չի կարող ամբողջությամբ արգելակել RNase-ի ակտիվությունը:Հետևաբար, 8-հիդրօքսիկինոլինը, գուանիդին իզոթիոցիանատը, β-մերկապտոէթանոլը և այլն ավելացվում են TRIzol-ին՝ էնդոգեն և էկզոգեն RNase արգելակելու համար:
Բջջային ՌՆԹ-ի արդյունահանման ժամանակ Տրիզոլը կարող է արագորեն լիզել բջիջները և արգելակել բջիջներից ազատված նուկլեազը, իսկ մնացորդային տրիզոլը զգալիորեն կնվազեցնի A260/A230 հարաբերակցությունը:
Մշակման եղանակ. Ցենտրիֆուգավորման ժամանակ պետք է նշել, որ Տրիզոլում առկա ֆենոլը հեշտությամբ լուծվում է ջրային փուլում 4°-ի և սենյակային ջերմաստիճանի պայմաններում:

4. Էթանոլի մնացորդ
Էթանոլն օգտագործվում է վերջնական գործընթացում՝ ԴՆԹ-ն նստեցնելու համար՝ միաժամանակ լուծարելով աղի իոնները, որոնք կարող են կապված լինել ԴՆԹ-ին:Ամենաբարձր կլանման ալիքի երկարությունըկլանման գագաթնակետըէթանոլը նույնպես 230-240 նմ է, ինչըկնվազեցնի նաև A260/A230 հարաբերակցությունը.
Էթանոլի մնացորդից խուսափելու մեթոդը կարող է կրկնվել երկու անգամ վերջնական զտման ընթացքում՝ փչելովգոլորշու գլխարկերկու րոպեի ընթացքում, որպեսզի էթանոլը լիովին գոլորշիանա, նախքան զտման համար բուֆեր ավելացնելը:
Այնուամենայնիվ, պետք է հայտնի լինի, որ հարաբերակցությունը միայն ՌՆԹ որակի գնահատման ցուցանիշ է։Եթե ​​վերը նշված գործողությունները խստորեն կարգավորվեն, ապա հարաբերակցության և ստանդարտ միջակայքի շեղումը մեծ ազդեցություն չի ունենա հոսանքով ներքև գտնվող փորձերի վրա:
Առնչվող ապրանքներ.
Կենդանիների ընդհանուր RNA մեկուսացման հավաքածու
Բույսերի ընդհանուր RNA մեկուսացման հավաքածու
Բջիջների ընդհանուր ՌՆԹ մեկուսացման հավաքածու
Plant Total RNA Isolation Kit Plus