Խնդրի վերլուծության ուղեցույց

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Ցածր եկամտաբերություն կամ ԴՆԹ-ի բացակայություն

Սովորաբար կան բազմաթիվ գործոններ, որոնք ազդում են գենոմային ԴՆԹ-ի ստացման վրա, ներառյալ նմուշի աղբյուրը, նմուշի տարիքը, նմուշի պահպանման պայմանները և վիրահատությունը:

Գենոմային ԴՆԹ-ն չհաջողվեց ստանալ արդյունահանման ժամանակ

1. Հյուսվածքների նմուշները ոչ պատշաճ կերպով պահվում կամ պահվում են չափազանց երկար, ինչը հանգեցնում է գենոմային ԴՆԹ-ի քայքայմանը:

Առաջարկություն. Հյուսվածքների նմուշները պահել հեղուկ ազոտի կամ -20-ի մեջ°C;փորձեք օգտագործել նոր հավաքագրված նմուշները գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար:

2. Նմուշի չափազանց փոքր քանակությունը կարող է հանգեցնել համապատասխան գենոմային ԴՆԹ-ի չարդյունահանմանը:

Առաջարկ. Հյուսվածքների նմուշների համար, որոնք պահպանվել են երկար ժամանակ կամ ունեն գենոմային ԴՆԹ-ի խիստ քայքայվածություն, հյուսվածքների նմուշների քանակը կարող է համապատասխան կերպով մեծացնել՝ զգալի գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար:Նմուշի քանակը կարող է որոշվել ըստ ԴՆԹ-ի կարիքների, սակայն թարմ նմուշը չպետք է գերազանցի 100 մգ-ը, իսկ չոր նմուշը չպետք է գերազանցի 30 մգ-ը:

3. Նմուշը չի հղկվում հեղուկ ազոտով կամ չափազանց երկար տեղադրվում հեղուկ ազոտից հետո:

Առաջարկ. ԴՆԹ-ի արդյունահանման ժամանակ նմուշը պետք է ամբողջությամբ մանրացվի հեղուկ ազոտով, որպեսզի կոտրվի բջջի պատը;աղալուց հետո, խնդրում ենք, նմուշի փոշին տեղափոխեք PL1 նախապես տաքացված 65 ջերմաստիճանում°C որքան հնարավոր է շուտ (հենց աղացած փոշին հալվի, գենոմային ԴՆԹ-ն կսկսի արագորեն քայքայվել):

4. Foregene Protease-ի ոչ պատշաճ պահպանումը հանգեցնում է գործունեության նվազեցման կամ ապաակտիվացման:

Առաջարկություն. Հաստատեք Foregene Protease-ի պահպանման պայմանները կամ փոխարինեք այն նոր Foregene Protease-ով ֆերմենտային հիդրոլիզի համար:

5. Հավաքածուն սխալ է պահվում կամ պահվում է չափազանց երկար, ինչի հետևանքով հանդերձում որոշ բաղադրիչներ խափանում են:

Առաջարկություն. Գնել նոր բույսերի գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման հավաքածու՝ համապատասխան գործողությունների համար:

6. Կոմպլեկտի ոչ պատշաճ օգտագործումը:

Առաջարկ. Գնել բույսերի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու՝ նվիրված բույսերի գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման և մաքրման նմուշներին:

7. Բուֆերային ՀԲ առանց ա ավելացնելուանջուր էթանոլ.

Առաջարկություն. Համոզվեք, որ ավելացրեք բացարձակ էթանոլի ճիշտ ծավալը Buffer WB-ում:

8. Էլուենտը ճիշտ չի կաթել սիլիցիումի թաղանթի վրա:

Առաջարկ. Ավելացրեք նախապես տաքացված էլուենտը 65-ում℃կաթիլ-կաթիլ դեպի սիլիկա գելի մեմբրանի մեջտեղը, և թողեք այն սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե, որպեսզի բարձրացնեք լուծույթի արդյունավետությունը:

Էքստրակցիա՝ ցածր բերքատվության գենոմային ԴՆԹ ստանալու համար

1. Նմուշը ոչ պատշաճ կերպով պահվում է կամ չափազանց երկար է պահվում, ինչը հանգեցնում է գենոմային ԴՆԹ-ի քայքայմանը:

Առաջարկություն. Պահպանեք հյուսվածքների նմուշները -20-ում℃;փորձեք օգտագործել նոր հավաքագրված հյուսվածքների նմուշները գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման համար:

2. Եթե հյուսվածքների նմուշների քանակը չափազանց փոքր է, ապա արդյունահանված գենոմային ԴՆԹ-ն ավելի քիչ կլինի:

Առաջարկ. Որոշ բույսերի նմուշներ հարուստ են ջրով, ինչպես օրինակ ջրային բույսերը, ինչպիսիք են ջրիմուռները և այլն, դեղաչափը կարող է համապատասխանաբար մեծացնել կամ ջուրը մի փոքր ջրազրկել վիրահատությունից առաջ:

3. Նմուշները մանրակրկիտ չեն մանրացվել հեղուկ ազոտով կամ մանրացնելուց հետո չափազանց երկար են մնացել սենյակային ջերմաստիճանում:

Առաջարկ. Հեղուկ ազոտի հղկումը պետք է լինի բավարար, և նմուշի բջիջների պատը պետք է հնարավորինս կոտրվի.Աղալից անմիջապես հետո նմուշի փոշին պետք է տեղափոխել 65℃հաջորդ քայլի համար նախապես տաքացված բուֆեր PL1:

4. Չօգտագործելով ճիշտ հանդերձանք:

Առաջարկություն. Օգտագործեք հատուկ բույսերի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու՝ բույսերի գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման և մաքրման համար:

5. Foregene Protease-ի ոչ պատշաճ պահպանումը հանգեցնում է ակտիվության նվազման կամ ապաակտիվացման:

Առաջարկություն. Հաստատեք Foregene Protease-ի պահպանման պայմանները կամ փոխարինեք այն նոր Foregene Protease-ով ֆերմենտային հիդրոլիզի համար:

6. Էլյուենտի խնդիր

Խորհուրդ.եթե օգտագործում եք ddH₂O կամ այլ էլուենտներ, համոզվեք, որ էլուենտի pH-ը գտնվում է 7,0-8,5 միջակայքում:

7. Էլյուենտը ճիշտ չի կաթում

Առաջարկ. Խնդրում ենք էլյուցիայի կաթիլը ավելացնել սիլիցիումի թաղանթի մեջտեղում և թողնել սենյակային ջերմաստիճանում 5 րոպե, որպեսզի բարձրացնեք լուծույթի արդյունավետությունը:

8. Էլյուենտի ծավալը չափազանց փոքր է

Առաջարկ.մլ.

Արդյունահանված գենոմային ԴՆԹ ցածր մաքրությամբ

Գենոմային ԴՆԹ-ի ցածր մաքրությունը կհանգեցնի ներքևում գտնվող փորձերի ձախողմանը կամ վատ ազդեցությանը, ինչպիսիք են.

1. Տարբեր սպիտակուցների աղտոտում, ՌՆԹ-ի աղտոտում:

Վերլուծություն. բուֆերային PW-ն չի օգտագործվել սյունակը լվանալու համար.Բուֆերային PW-ն չի օգտագործվել սյունը ցենտրիֆուգման ճիշտ արագությամբ լվանալու համար:

Առաջարկություն. փորձեք ապահովել, որ վերին հեղուկում տեղումներ չլինեն, երբ սյունակի միջով անցկացվում է վերին նյութը.համոզվեք, որ լվացեք մաքրման սյունը Buffer PW-ով ըստ հրահանգների, և այս քայլը չի ​​կարելի բաց թողնել:

2. Կեղտոտ իոնային աղտոտում.

Վերլուծություն. Բուֆերային WB լվացման սյունակը բաց է թողնվել կամ լվացվել է միայն մեկ անգամ, ինչը հանգեցրել է մնացորդային իոնային աղտոտման:

Առաջարկություն. Համոզվեք, որ երկու անգամ լվացեք Buffer WB-ով` համաձայն հրահանգների, մնացորդային իոնները հնարավորինս հեռացնելու համար:

3. RNase աղտոտում.

Վերլուծություն. էկզոգեն RNase ավելացվում է բուֆերին;Բուֆերային PW-ում լվացման սխալ գործողությունը կհանգեցնի մնացորդային RNase-ի և կազդի ՌՆԹ-ի ներքևի փորձարարական գործողությունների վրա, ինչպիսիք են in vitro արտագրումը:

Առաջարկ. Foregene սերիայի նուկլեինաթթվի արդյունահանման փաթեթները կարող են հեռացնել ՌՆԹ-ն առանց լրացուցիչ RNase, և բույսերի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուի բոլոր ռեակտիվներին անհրաժեշտ չէ RNase;համոզվեք, որ լվացեք մաքրման սյունը Buffer PW-ով ըստ հրահանգների, և այս քայլը չի ​​կարելի բաց թողնել:

4. Էթանոլի մնացորդներ.

Վերլուծություն. Մաքրման սյունը բուֆեր WB-ով լվանալուց հետո դատարկ խողովակով ցենտրիֆուգացիա չի իրականացվել:

Առաջարկություն. հետևեք դատարկ խողովակի պատշաճ ցենտրիֆուգման հրահանգներին:

Հրահանգների ձեռնարկ.

Բույսերի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուի հրահանգների ձեռնարկ