(96 հորատանցք) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR հավաքածու – SYBR Green I
Նկարագրություններ
Այն(96 լավ) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR հավաքածու–SYBR Գրին Իապահովում էեզակի լիզի բուֆերային համակարգto արագորեն ազատում է ՌՆԹ-նմշակված բջիջիցնմուշներ RT-qPCR ռեակցիաների համար՝ վերացնելով ժամանակատար և աշխատատարՌՆԹ-ի մաքրման գործընթաց, և պահանջվող ՌՆԹ կաղապարը ստանալու համար տևում է ընդամենը 7 րոպե:Այն5× Direct RT Mixև2× Direct qPCR Mix-SYBRտրամադրված տուփի մեջ կարող է արագ ևարդյունավետ կերպով ստանալ իրական ժամանակի քանակականPCR արդյունքները.
5× Direct RT Mix-ը և 2× Direct qPCR Mix-SYBR-ն ունեն ուժեղ արգելակիչ հանդուրժողականություն և կարող են օգտագործել փորձարկվող նմուշի լիզատը որպես արդյունավետ հակադարձ տառադարձման և հատուկ ուժեղացման կաղապար:Ռեակտիվը պարունակում է Foregene-ի եզակի հակադարձ տրանսկրիպտազ՝ ՌՆԹ-ի նկատմամբ բարձր հարաբերակցությամբ, ինչպես նաև տաք D-Taq ԴՆԹ պոլիմերազ, dNTPs, MgCl:2 , ռեակցիայի բուֆեր, PCR օպտիմիզատոր և կայունացուցիչ, և կարող է օգտագործվել լիզի բուֆերի հետ միասին՝ նմուշը արագ, հեշտությամբ և ճշգրիտ հայտնաբերելու համար, և այն ունի բարձր զգայունության, ուժեղ յուրահատկության և լավ կայունության բնութագրեր:
Հավաքածուն ուղղված է 96 հորատանցքով մշակված բջիջների միկրոհամակարգային լիզմանը և ունի լավ միատեսակություն և հետևողականություն.Հավաքածուի բաղադրիչներն ապահովում են 96 լիզի ռեակցիա, 96 հակադարձ տրանսկրիպցիոն ռեակցիա և 96×2 qPCR ռեակցիա, որոնք կարող են համապատասխանել 96 ջրանցքի բջիջների ափսեին մեկանգամյա օգտագործման համար՝ խուսափելով ռեակտիվների կրկնակի բացման, սառեցման և հալեցման հետևանքով առաջացած աղտոտումից և ռեագենտների արդյունավետության վատթարացումից:
Հավաքածուի բաղադրիչներ
| Կոմպլեկտի կազմը ( 50 μL lysis համակարգ/20 մլRT ռեակցիայի համակարգ /20μL qPCR ռեակցիայի համակարգ) | DRT-03011 | Դիտողություն | |
| 96Տ | |||
| մասI | ԲուֆերCL | 5 մլ | ԲջջԼիզիս |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| ԲուֆերST | 500 μL | ||
| մաս II | ԴՆԹՌետին | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 մL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Reference ներկ | 400µL | ||
| RNase- ԱնվճարդդՀ2 O | 1,7 մլ |
| |
| Mտարեկան | 1 կտոր | 1 մատուցում | |
*: Լիզի ռեակտիվ ԴՆԹ ռետինը ներառված է փաթեթի II մասում;Cell Lysis, RT և qPCR բաղադրիչները կարելի է գնել առանձին:
Առանձնահատկություններ և առավելություններ
■Պարզ և արդյունավետ. Cell Direct RT տեխնոլոգիայով ՌՆԹ-ի նմուշները կարելի է ստանալ ընդամենը 7 րոպեում:
■ Նմուշի պահանջարկը փոքր է, մինչև 10 բջիջ կարող է փորձարկվել:
■ Բարձր թողունակություն. այն կարող է արագ հայտնաբերել ՌՆԹ-ն 384, 96, 24, 12, 6 հորատանցքերի թիթեղներում մշակված բջիջներում:
■ ԴՆԹ ռետինը կարող է արագ հեռացնել ազատված գենոմները՝ զգալիորեն նվազեցնելով ազդեցությունը հետագա փորձարարական արդյունքների վրա:
■ Օպտիմիզացված RT և qPCR համակարգը դարձնում է երկքայլ RT-PCR հակադարձ տրանսկրիպցիան ավելի արդյունավետ, իսկ PCR-ն ավելի կոնկրետ և ավելի դիմացկուն RT-qPCR ռեակցիայի ինհիբիտորների նկատմամբ:
Կոմպլեկտի հավելված
Կիրառման շրջանակը՝ կուլտիվացված բջիջներ:
- Նմուշի լուծմամբ արձակված ՌՆԹ. կիրառելի է միայն այս փաթեթի RT-qPCR ձևանմուշի համար:
- Կոմպլեկտը կարող է օգտագործվել հետևյալ նպատակների համար՝ գենային էքսպրեսիայի վերլուծություն, siRNA միջնորդավորված գենի խլացման էֆեկտի ստուգում, դեղերի սքրինինգ և այլն։
Պահպանում և պահպանման ժամկետ
Այս փաթեթի I մասը պետք է պահվի 4-ում℃;Երկրորդ մասը պետք է պահվի -20℃ ջերմաստիճանում:
Foregene Protease Plus II-ը պետք է պահվի 4-ում℃, մի սառչեք -20℃ ջերմաստիճանում:
Ռեակտիվ 2×Direct qPCR Mix-Taqman-ը պետք է պահվի -20-ում℃մթության մեջ;հաճախակի օգտագործման դեպքում այն կարող է պահվել նաև 4-ում℃ կարճաժամկետ պահպանման համար (օգտագործել 10 օրվա ընթացքում):
Իրական ժամանակում PCR պրայմերների նախագծման սկզբունքները
Forward Primer և Reverse Primer
Իրական ժամանակում PCR-ի համար այբբենարանի ձևավորումը շատ կարևոր է:Պրայմերները կապված են PCR ուժեղացման առանձնահատկությունների և արդյունավետության հետ և կարող են նախագծվել հետևյալ սկզբունքներով.
- Այբբենարանի երկարությունը՝ 18-30bp:
- GC պարունակությունը՝ 40-60%:
- Tm արժեքը. Primer նախագծման ծրագրակազմը, ինչպիսին է Primer 5-ը, կարող է տալ այբբենարանի Tm արժեքը:Վերև և ներքև գտնվող այբբենարանների Tm արժեքները պետք է հնարավորինս մոտ լինեն:Կարող է օգտագործվել նաև Tm հաշվարկման բանաձևը՝ Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T):PCR-ն իրականացնելիս որպես եռացման ջերմաստիճան սովորաբար ընտրվում է պրայմերային Tm արժեքից ցածր 5 °C ջերմաստիճան (եռացման ջերմաստիճանի համապատասխան աճը կարող է մեծացնել PCR ռեակցիայի առանձնահատկությունը):
- Պրայմերներ և PCR արտադրանք.
- Դիզայնի այբբենարան PCR ուժեղացման արտադրանքի երկարությունը նախընտրելի է 100-150 bp:
- Կաղապարի երկրորդական կառուցվածքային տարածքում նախագծային այբբենարանները պետք է հնարավորինս խուսափել:
- Խուսափեք 2 կամ ավելի փոխլրացնող հիմքերի ձևավորումից վերև և ներքև գտնվող այբբենարանների 3' ծայրերի միջև:
- Primer 3′ տերմինալային հիմքը չի կարող առկա լինել 3 լրացուցիչ հաջորդական G կամ C-ով:
- Պրայմերներն իրենք չեն կարող ունենալ լրացուցիչ կառուցվածքներ, հակառակ դեպքում կձևավորվի մազակալի կառուցվածք, որը կազդի PCR ուժեղացման վրա:
- ATCG-ն պետք է հնարավորինս հավասարաչափ բաշխվի այբբենարանի հաջորդականությամբ, և 3' տերմինալային հիմքը պետք է խուսափել, քանի որ T.
Հավելված1: Cell DirectRT-qPCR Հավաքածուի բաղադրիչt հավելումների փաթեթ
1.Cell Lysis Solution
| Բջջային լիզի լուծույթ | |||
| Հավաքածուի բաղադրիչներ (24-հորատանցքերի լիզի համակարգ / ջրհոր) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Տ | 500 Տ | ||
| մասԻ | Բուֆեր CL | 20 մլ | 100 մլ |
| Foregene Protease Plus II | 400 մլ | 1 մլ × 2 | |
| Բուֆեր ST | 1 մլ × 2 | 10 մլ | |
| մասII | ԴՆԹ ռետին | 400 մլ | 1 մլ × 2 |
| RT Միքս | |
| Հավաքածուի բաղադրիչներ (20 մկլ ռեակցիայի համակարգ) | DRT-01011-B1 |
| 200 Տ | |
| 5× Direct RT Mix | 800 մլ |
| ՌՆազազերծ ddH2O | 1,7 մլ × 2 |
| qPCR խառնուրդ | ||
| Հավաքածուի բաղադրիչներ (20 մկլ ռեակցիայի համակարգ) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Տ | 1000 Տ | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 մլ × 2 | 1,7 մլ × 6 |
| 20× ROX Reference ներկ | 40 մլ | 200 մլ |
| ՌՆազազերծ ddH2O | 1,7 մլ | 10 մլ |
Հրահանգների ձեռնարկներ.
