Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready մի քայլ qRT-PCR հավաքածուների զոնդ
Նկարագրություններ
Այս արտադրանքը օգտագործում է եզակի լիզի բուֆերային համակարգ՝ RT-qPCR ռեակցիաների համար մշակված բջիջների նմուշներից ՌՆԹ-ն արագ ազատելու համար՝ վերացնելով ՌՆԹ-ի ժամանակատար և աշխատատար մաքրման գործընթացը, և ընդամենը 7 րոպե՝ պահանջվող ՌՆԹ ձևանմուշը ստանալու համար՝ 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman-ի կողմից տրամադրված արագ և արդյունավետ որակի արդյունքներով:
5× Direct RT Mix-ը և 2× Direct qPCR Mix-Taqman-ն ունեն ուժեղ արգելակող հանդուրժողականություն և կարող են արդյունավետ հակադարձում և հատուկ ուժեղացում կատարել՝ օգտագործելով որպես ձևանմուշ չափվող նմուշի լիզատ:Ռեագենտը պարունակում է Foregene հակադարձ տրանսկրիպտազ, տաք D-Taq ԴՆԹ պոլիմերազ, dNTPs, MgCl2Reaction Buffer, PCR Optimizer և Stabilizer, որոնք կարող են օգտագործվել լիզի բուֆերի հետ՝ նմուշները արագ և հեշտությամբ հայտնաբերելու համար և ունի բարձր զգայունության, յուրահատկության և կայունության բնութագրեր:
Տեխնիկական պայմաններ
200 թ×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Հավաքածուի բաղադրիչներ
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Հավաքածուի բաղադրիչներ 20 μl qPCR ռեակցիայի համակարգ | DRT-01021 | DRT-01022 | Նշում | |
| 200 Տ | 1000 Տ | |||
|
մաս I | Բուֆեր CL | 4 մլ | 20 մլ | Բջջային Լիզիս |
| Foregene Protease Plus II | 80 մլ | 400 մլ | ||
| Բուֆեր ST | 400 մլ | 1 մլ × 2 | ||
|
մաս II | ԴՆԹ ռետին | 80 մլ | 400 մլ | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 մլ | 800 մլ | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 մլ × 2 | 1,7 մլ × 6 | qPCR | |
| 20×ROX Reference ներկ | 40 մլ | 200 մլ | ||
| ՌՆազազերծ ddH2O | 1,7 մլ | 10 մլ | ||
| Հրահանգների ձեռնարկ | 1 հատ | 1 հատ | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman կարելի է գնել առանձին
Առանձնահատկություններ և առավելություններ
■Պարզ և արդյունավետ. Cell Direct RT տեխնոլոգիայով ՌՆԹ-ի նմուշները կարելի է ստանալ ընդամենը 7 րոպեում:
■ Նմուշի պահանջարկը փոքր է, մինչև 10 բջիջ կարող է փորձարկվել:
■ Բարձր թողունակություն. այն կարող է արագ հայտնաբերել ՌՆԹ-ն 384, 96, 24, 12, 6 հորատանցքերի թիթեղներում մշակված բջիջներում:
■ ԴՆԹ ռետինը կարող է արագ հեռացնել ազատված գենոմները՝ զգալիորեն նվազեցնելով ազդեցությունը հետագա փորձարարական արդյունքների վրա:
■ Օպտիմիզացված RT և qPCR համակարգը դարձնում է երկքայլ RT-PCR հակադարձ տրանսկրիպցիան ավելի արդյունավետ, իսկ PCR-ն ավելի կոնկրետ և ավելի դիմացկուն RT-qPCR ռեակցիայի ինհիբիտորների նկատմամբ:
Կոմպլեկտի հավելված
Կիրառման շրջանակը՝ կուլտիվացված բջիջներ:
- Նմուշի լուծմամբ արձակված ՌՆԹ. կիրառելի է միայն այս փաթեթի RT-qPCR ձևանմուշի համար:
- Կոմպլեկտը կարող է օգտագործվել հետևյալ նպատակների համար՝ գենային էքսպրեսիայի վերլուծություն, siRNA միջնորդավորված գենի խլացման էֆեկտի ստուգում, դեղերի սքրինինգ և այլն։
Պահպանում և պահպանման ժամկետ
Այս փաթեթի I մասը պետք է պահվի 4-ում℃;Երկրորդ մասը պետք է պահվի -20℃ ջերմաստիճանում:
Foregene Protease Plus II-ը պետք է պահվի 4-ում℃, մի սառչեք -20℃ ջերմաստիճանում:
Ռեակտիվ 2×Direct qPCR Mix-Taqman-ը պետք է պահվի -20-ում℃մթության մեջ;հաճախակի օգտագործման դեպքում այն կարող է պահվել նաև 4-ում℃ կարճաժամկետ պահպանման համար (օգտագործել 10 օրվա ընթացքում):
Իրական ժամանակում PCR պրայմերների նախագծման սկզբունքները
Forward Primer և Reverse Primer
Իրական ժամանակում PCR-ի համար այբբենարանի ձևավորումը շատ կարևոր է:Պրայմերները կապված են PCR ուժեղացման առանձնահատկությունների և արդյունավետության հետ և կարող են նախագծվել հետևյալ սկզբունքներով.
- Այբբենարանի երկարությունը՝ 18-30bp:
- GC պարունակությունը՝ 40-60%:
- Tm արժեքը. Primer նախագծման ծրագրակազմը, ինչպիսին է Primer 5-ը, կարող է տալ այբբենարանի Tm արժեքը:Վերև և ներքև գտնվող այբբենարանների Tm արժեքները պետք է հնարավորինս մոտ լինեն:Կարող է օգտագործվել նաև Tm հաշվարկման բանաձևը՝ Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T):PCR-ն իրականացնելիս որպես եռացման ջերմաստիճան սովորաբար ընտրվում է պրայմերային Tm արժեքից ցածր 5 °C ջերմաստիճան (եռացման ջերմաստիճանի համապատասխան աճը կարող է մեծացնել PCR ռեակցիայի առանձնահատկությունը):
- Պրայմերներ և PCR արտադրանք.
- Դիզայնի այբբենարան PCR ուժեղացման արտադրանքի երկարությունը նախընտրելի է 100-150 bp:
- Կաղապարի երկրորդական կառուցվածքային տարածքում նախագծային այբբենարանները պետք է հնարավորինս խուսափել:
- Խուսափեք 2 կամ ավելի փոխլրացնող հիմքերի ձևավորումից վերև և ներքև գտնվող այբբենարանների 3' ծայրերի միջև:
- Primer 3′ տերմինալային հիմքը չի կարող առկա լինել 3 լրացուցիչ հաջորդական G կամ C-ով:
- Պրայմերներն իրենք չեն կարող ունենալ լրացուցիչ կառուցվածքներ, հակառակ դեպքում կձևավորվի մազակալի կառուցվածք, որը կազդի PCR ուժեղացման վրա:
- ATCG-ն պետք է հնարավորինս հավասարաչափ բաշխվի այբբենարանի հաջորդականությամբ, և 3' տերմինալային հիմքը պետք է խուսափել, քանի որ T.
Հավելված1: Cell DirectRT-qPCR Հավաքածուի բաղադրիչt հավելումների փաթեթ
1.Cell Lysis Solution
| Բջջային լիզի լուծույթ | |||
| Հավաքածուի բաղադրիչներ (24-հորատանցքերի լիզի համակարգ / ջրհոր) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Տ | 500 Տ | ||
| մասԻ | Բուֆեր CL | 20 մլ | 100 մլ |
| Foregene Protease Plus II | 400 մլ | 1 մլ × 2 | |
| Բուֆեր ST | 1 մլ × 2 | 10 մլ | |
| մասII | ԴՆԹ ռետին | 400 մլ | 1 մլ × 2 |
| RT Միքս | |
| Հավաքածուի բաղադրիչներ (20 մկլ ռեակցիայի համակարգ) | DRT-01011-B1 |
| 200 Տ | |
| 5× Direct RT Mix | 800 մլ |
| ՌՆազազերծ ddH2O | 1,7 մլ × 2 |
| qPCR խառնուրդ | ||
| Հավաքածուի բաղադրիչներ (20 մկլ ռեակցիայի համակարգ) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Տ | 1000 Տ | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 մլ × 2 | 1,7 մլ × 6 |
| 20× ROX Reference ներկ | 40 մլ | 200 մլ |
| ՌՆազազերծ ddH2O | 1,7 մլ | 10 մլ |
Հրահանգների ձեռնարկներ.
