Ուղղակի RT-qPCR Kit III
Հավաքածուի նկարագրություն.
◮Direct RT-qPCR Kit-ը, օգտագործելով Foregene-ի կողմից մշակվող Foreasy Reverse Transcriptase-ը և Foreasy HS Taq DNA Polymerase-ը, յուրահատուկ ռեակցիայի բուֆերով, այս փաթեթը դարձնում է ուժեղ դիմադրողականությամբ և համատեղելիությամբ, և այն կարող է ուղղակիորեն փորձարկել ռեակցիան՝ օգտագործելով Foregene Lysis համակարգը որպես ձևանմուշ:Այս փաթեթը կարող է կիրառվել COVID-19 նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հավաքածուի և այլ պաթոգեն բակտերիաների նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հավաքածուի մշակման համար:
Նկարագրություն
Direct RT-qPCR հավաքածուն ապահովում է առանձին փաթեթավորված RT-qPCR բուֆեր (Foreasy HS Taq ԴՆԹ պոլիմերազով) և բարձր արդյունավետությամբForeasy Reverse Transcriptase (MMLV),դարձնելով այն հարմար է հետնամասային փաթեթների ստեղծման և համակարգի ճշգրտման համար՝ պարզ ստուգման շրջանակներում:
Direct RT-qPCR Kit-ը, օգտագործելով Foregene-ի կողմից մշակվող Foreasy Reverse Transcriptase-ը և Foreasy HS Taq DNA Polymerase-ը, յուրահատուկ ռեակցիայի բուֆերով, այս փաթեթը դարձնում է ուժեղ դիմադրողականությամբ և համատեղելիությամբ, և այն կարող է ուղղակիորեն փորձարկել ռեակցիան՝ օգտագործելով Foregene Lysis համակարգը որպես ձևանմուշ:Այս փաթեթը կարող է կիրառվել COVID-19 նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հավաքածուի և այլ պաթոգեն բակտերիաների նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հավաքածուի մշակման համար:
Այս փաթեթը կարող է ուղղակիորեն լինել IVD արտադրանքի բաղադրիչը՝ հեշտությամբ և արագ օգտագործելով:Այն միայն հեշտ ստուգման կարիք ունի՝ առանց նորից զարգացնելու։
Տեխնիկական պայմաններ
500Տ, 50000Տ
Հավաքածուի բաղադրիչներ
| Կոմպլեկտի բովանդակությունը (20 μL ռեակցիայի համակարգ) | ԻՄ-05111-03 | ԻՄ-05112-03 |
| 500 Տ | 50000 Տ | |
| Ֆորեզի Ռէվերս Տրանսկրիպտազ(200 U/μL) | 50 մլ× 1 | 1 մլ× 5 |
| 2× Direct qPCRՄիքս-Թաքման | 1 մլ × 5 | 500 մլ× 1 |
| Հրահանգ | 1 | 1 |
Գործառնական քայլեր
A: Պատրաստեք ձևանմուշը և ռեագենտը
1. Պատրաստեք պատրաստված ՌՆԹ ձևանմուշ (ՌՆԹ կաղապարը արդյունահանելու և մաքրելու համար խորհուրդ է տրվում օգտագործել Foregene Total RNA Isolation Kit սերիայի հավաքածու) կամ ճաքող արտադրանքի նմուշ (խորհուրդ է տրվում օգտագործել Foregene Lysis համակարգը), հատուկ պրայմերներ (10 μM) և այլ համապատասխան սպառվող նյութեր, գործիք:
2. Տեղադրեք 2× Direct RT-qPCR բուֆերը, RNase-Free ddH2O և 20× ROX Reference ներկը (եթե դա անհրաժեշտ է) սառույցով տուփի մեջ, դարձնելով դրանք բնական հալչելու և նրբորեն խառնելով:
B. Պատրաստել RT-qPCR համակարգը
Ստացեք ռեակցիոն համակարգի ռեակցիոն բուֆերի ծավալի կեսը (օրինակ, եթե համակարգի ծավալը 20 μL է, այն պետք է ստանա 10 μL 2× Direct RT-qPCR բուֆեր). Համարհամապատասխան քանակությամբ ֆերմենտ, առաջարկում ենքM-MLV: 10-30 U/20 μL ռեակցիայի համակարգ,ԹաքԴՆԹ պոլիմերազ:1-2 U/20 μL ռեակցիայի համակարգսա մեր առաջարկն է, դուք պետք է փորձարկեք և կարգավորեք այն), ավելացնել ՌՆԹ կաղապար, հատուկ պրայմերներ և զոնդեր և ավելացնել RNase-Free ddH2O-ից մինչև 20 մլ:RT-qPCR ռեակցիայի համակարգի հատուկ պատրաստումը կարելի է վկայակոչել հետևյալ աղյուսակ 1-ում:
Աղյուսակ 1. Պատրաստել RT-qPCR համակարգը
| Բաղադրիչ | Ծավալը | Վերջնական կոնցենտրացիան |
| 2× Ուղղակի RT-qPCR բուֆեր | 10 մլ | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq ԴՆԹ պոլիմերազ | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 մլ | 50-900nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 մլ | 50-900nM |
| Զոնդ (4 մկՄ) | 1 մլ | 200 նմ |
| Կաղապար (ՌՆԹ կամ Լիզատ) | X μL | |
| 20× ROX Reference ներկ | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Ընդհանուր Ծավալ | 20 մլ |
Նշում. Forward Primer-ը և Reverse Primer-ը թիրախ գենի հատուկ պրայմերներ են:qPCR-ի համակարգը կարող է ճշգրտվել ըստ գործնական փորձարարական և PCR մոդելների:Առաջարկվում է 400nM պրայմերների մեծ մասի վերջնական կոնցենտրացիայի համար:Խնդրում ենք, կարգավորեք հատուկ պրայմերների և զոնդերի ծավալը՝ ըստ պատրաստված կոնցենտրացիայի և առաջարկվող վերջնական կոնցենտրացիայի:
1*. Ընտրեք ROX Reference ներկի համապատասխան վերջնական կոնցենտրացիան՝ ըստ տարբեր քանակական PCR գործիքների:Ընդհանուր քանակական PCR գործիքների ROX Reference Dye-ի օպտիմալ կոնցենտրացիան ներկայացված է հետևյալ աղյուսակում.
| Քանակական PCR գործիքներ | ROX Reference ներկի վերջնական կոնցենտրացիան |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Քայլ առաջին,և այլն: | 1× (օրինակ, 20 μL ռեակցիոն համակարգում ավելացնել 1 μl 20×ROX Reference ներկ) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P և Mx4000 և այլն: | 0.5× (օրինակ, 20 մկլ ռեակցիայի համակարգում ավելացնել 0.5 μl 20×ROX Reference ներկ) |
| Roche PCR գործիք, Bio-Rad PCR գործիք, Eppendorf քանակական PCR գործիք և այլն: | Առանց ROX Reference ներկի |
Պահպանում և պահպանման ժամկետ
Հավաքածուն պետք է պահվի -20 ± 5℃ ջերմաստիճանում:Այն պետք է անհապաղ պահել -20℃ թերմոստատիկ սառնարանում։Գործողության ժամկետը 2 տարի է, եթե այն պահպանվի համապատասխան վիճակում։
