Ուղղակի RT-qPCR հավաքածու
Հավաքածուի նկարագրություն.
◮ Direct RT-qPCR Kit-ը, օգտագործելով Foregene-ի կողմից մշակվող Foreasy Reverse Transcriptase-ը և Foreasy HS Taq DNA Polymerase-ը, յուրահատուկ ռեակցիայի բուֆերով, այս փաթեթը դարձնում է ուժեղ դիմադրողականությամբ և համատեղելիությամբ, և այն կարող է ուղղակիորեն փորձարկել ռեակցիան՝ օգտագործելով Foregene Lysis համակարգը որպես ձևանմուշ:Այս փաթեթը կարող է կիրառվել COVID-19 նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հավաքածուի և այլ պաթոգեն բակտերիաների նուկլեինաթթվի հայտնաբերման հավաքածուի մշակման համար:
Նկարագրություն
Direct RT-qPCR Kit-ն ապահովում է առանձին փաթեթավորված RT-qPCR բուֆեր և բարձր արդյունավետ ֆերմենտխառնուրդ (Taq, M-MLV, RI)՝ այն հարմարեցնելով հետին մասերի և համակարգերի ստեղծման համարճշգրտում, պարզ ստուգման շրջանակներում:
Տեխնիկական պայմաններ
500Տ, 50000Տ
Հավաքածուի բաղադրիչներ
| Կոմպլեկտի բովանդակությունը (20 μL ռեակցիայի համակարգ) | ԻՄ-05111-01 | ԻՄ-05112-01 |
| 500 Տ | 50000 Տ | |
| Ուղղակի ֆերմենտային խառնուրդ | 500 մլ× 1 | 50 մլ× 1 |
| 2× Ուղղակի RT-qPCR բուֆեր | 1 մլ× 5 | 500 մլ× 1 |
| Հրահանգ | 1 | 1 |
Գործառնական քայլեր
Նախքան ռեագենտի պատրաստումը, փաթեթի բոլոր ռեակտիվները պետք է հալվեն սենյակային ջերմաստիճանում և նրբորեն խառնվեն:
A: Պատրաստել of կաղապար և ռեագենտ
1. Պատրաստեք պատրաստված ՌՆԹ ձևանմուշ (ՌՆԹ կաղապարը արդյունահանելու և մաքրելու համար խորհուրդ է տրվում օգտագործել Foregene Total RNA Isolation Kit սերիայի հավաքածու) կամ ճաքող արտադրանքի նմուշ (խորհուրդ է տրվում օգտագործել Foregene Lysis համակարգը), հատուկ պրայմերներ (10 μM) և այլ համապատասխան սպառվող նյութեր, գործիք:
2. Տեղադրեք 2× Direct RT-qPCR բուֆեր, RNase-Free ddH2O և 20× ROX Reference ներկ (եթե դա'անհրաժեշտ է) սառույցով տուփի մեջ, որպեսզի դրանք բնականորեն հալվեն և նրբորեն խառնվեն:
B: Պատրաստել of RT-qPCR համակարգ
Աղյուսակ 1 : Պատրաստել of RT-qPCR sհամակարգ
| Բաղադրիչ | Ծավալը | Վերջնական կոնցենտրացիան |
| 2× Ուղղակի RT-qPCR բուֆեր | 10 մլ | 1× |
| Ուղղակի ֆերմենտային խառնուրդ | 1μL | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 մլ | 50-900nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 մլ | 50-900nM |
| Զոնդ (4 մկՄ) | 1μL | 200 նմ |
| Կաղապար (ՌՆԹ կամ Լիզատ) | X μL | |
| 20×ROX Reference ներկ | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Ընդհանուր Ծավալ | 20μL |
C: Սահմանել որ RT-qPCR ռեակցիա ծրագիրը
Աղյուսակ 2 : RT-qPCR արձագանքում ենon ծրագիրը կարգավորումը (համար օրինակ: երկու-քայլ մեթոդ)
| Քայլ | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլեր | Բովանդակություն | |
| 1 | 50℃ | 15 րոպե | 1* | 1 | Հակադարձ արտագրում |
| 2 | 95℃ | 1 րոպե | 1 | Նախադենատուրացիա | |
| 3 | 95℃ | 10 վրկ | 40-45 թթ | Դենատուրացիա | |
| 60℃ | 30 վրկ 2* | Anneal/Extension | |||
Պահպանում և պահպանման ժամկետ
-Հավաքածուն պետք է պահվի -20-ում± 5℃.Գործողության ժամկետը 12 ամիս է։
- Խուսափեք սառեցման-հալման կրկնվող ցիկլերից (<5 ցիկլեր):
